رديابي و شناسايي مولكولي توسپوويروس هاي آلوده كننده ي سبزيجات در منطقه مركزي ايران

چكيده فارسي :

چكيده درگياهان خانواده Solanaceae تعداد از محصـولات مهـم كشـاورز از جملـه سـيب ـ ـ ـ ـ ـ زميني گوجه فرنگي و فلفل تحت تاثير عوامل بيمار زا ويروسي زياد قـرار ـ ميگيرند كه ويروس ها جنس Tospovirus از آن جمله اند گونه ها متعـدد ايـن ـ ـ جنس ويروسي خسارت زياد را به محصولات زراعي باغي و زينتي وارد ميسازند كه از مهمترين آنها مي توان به ويروس پژمردگي لكها گوجهفرنگي Tomato spotted wilt virus TSWV ويروس لكه نكروتيـك گـل حنـا Impatiens necrotic spot virus INSV و ويـروس ـ ـ ـ ـ حلقه زرد گوجهفرنگي Tomato yellow ring virus TYRV اشاره نمود با توجه بـه اهميـت ـ ـ اقتصاد زياد اين سه ويروس و كمبود اطلاعات در مورد وضعيت گسترش آنهـا در ـ منطقه مركز ايران ضرور بود مطالعاتي در مورد پراكنش و دامنه ميزبـاني ـ آنها در اين منطقه صـورت گيـرد بـدين منظـور طـي سـالها ۴ از ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـي ـاه زينتـ ـين گيـ ـهفرنگي ـيبزميني و همچنـ سـ ـت گوجـ ـهها و ـزارع كشـ مـ گلخانـ آلسترومريا با علائم توصيف شده برا توسپوويروسها نمونهبردار گرديد از نمونهها مزبور به روش ليتيوم كلرايد RNA كـل اسـتخراج شـد در ارزيـابي ـ ـ ـ ـ امكان آلوده بودن نمونهها به ويروس ها جنس توسپوويروس RNA كل هر نمونه با جفت آغازگر اختصاصي جنس تاسپوويروس 5344 gl3637 gl تحت واكـنش RT PCR قـرار ـ ـ گرفت و نمونههايي كه الگو باند مورد انتظـار bp را تكثيـر كردنـد ـ ـ ـ جهت بررسيها دقيق تر انتخاب شدند نمونهها انتخابي با جفـت آغازگرهـا ـ ـ ـــــي 1 bp S1983 for S2676 rev bp S1976 S2847 ۶ bp TSWV 2 TSWV و اختصاصـ 572002 bp FJJ200274 FJJ جهت رديـابي ۶ bp INSV F3 INSV R2 TSWV و INSV N5 INSV ـ 3 bp N جهت رديابي INSV و 2 ۵bp N1 N جهت رديابي TYRV در واكنش RT PCR مورد ارزيابي قرار گرفتند محصول PCR تكثير شده تعداد از نمونه ها تعيين ترادف نوكلئوتيد گرديد و با نرم افزار BLAST بررسي شد كه بر اساس نتايج بدست آمده حضور دو ويروس TSWV و TYRV در مزارع و گلخانه هاي منطقه تاييـد ـ شد در مجموع از نمونه جمع آور شده در استان اصفهان و چهار محال و بختيار نمونه TSWV سه جدايه از فلفل سه جدايـه از سـيب زمينـي و ـ ـ ـ چهار جدايه از گوجه فرنگي و نمونه TYRV جدايه از گوجه فرنگـي و ـ جدايه از آلسترومريا شناسايي شدند در طي اين بررسي هيچ نمونـه آلـوده ـ ـ به INSV رديابي نگرديد به منظور انجام مقايسـات مولكـولي جدايـه هـا دو ـ ـ ـ ـ گونه TSWV و TYRV ژن كامـل نوكلئوكپسـيد تعـداد از نمونـهها آلـوده و ـ ـ ـ ـ ـ متفاوت به لحاظ ميزباني و جغرافيايي تكثير همسانه ساز و تعيين تـرادف ـ شدند نتايج همرديف ساز چند تايي توالي ها بااستفاده از نرم افـزار ـ CLC 5 7 Sequence Viewer و ترسيم ماتريس تشابه با استفاده از نرم افزار0 4 DNAMAN نشان داد كه جدايهها TSWV و TYRV اصفهان و چهار محال و بختيار در هر دو سـطح ـ نوكلئوتيد و آمينواسيد شباهت زياد در داخل خود دارند به طور كه بين جدايهها TSWV ميانگين تشابه و بين جدايهها TYRV ميـانگين تشـابه ـ ـ مشاهده شد همرديف ساز چند تايي توالي آمينواسيد ژن نوكلئوكپسيد جدايهها مورد بررسي TSWV در اين پژوهش با برخـي از جدايـهها موجـود در ـ ـ ـ بانك ژن نيزشـباهت بـالايي ۴۶ را نشـان داد بـر اسـاس ترسـيم درخـت ـ ـ ـ ـ ـ ـ ـ تبارزايي بـه روش Neighbor joining بـا اسـتفاده از نـرم افـزار0 4 DNAMAN همـه ـ ـ ـ ـ ـ ـ جدايهها ايراني TSWV شامل جدايه هاي ايـن تحقيـق و دو جدايـه موجـود در ـ ـ ـ ـ بانك ژن با شماره هاي دسترسي 749998 KT و 849998 KT در گروه II قرار گرفتند دو جدايه از آفريقا جنوبي با شماره هـاي دسترسـي 006692 AJ و 48210 CAC در ـ ـ گروه I و جدايه هايي از آمريكا اروپا و آسـيا درگـروه III قـرار گرفتنـد ـ ـ ـ ـ همرديف ساز چند تايي بين جدايهها TYRV اصفهان و چهارمحـال و بختيـار و ـ ـ جدايهها موجود در بانك ژن نيز درجات بالايي از تشـابه ۶ را نشـان ـ ـ داد بر اساس درخت تبار زايي رسم شده بـه روش Neighbor joining بـا اسـتفاده از ـ ـ ـ نرم افزار0 4 DNAMAN همه جدايهها ايراني در گروه II استرينها s و گروه III استرينها t قرار گرفتند و از گروه جدايهها لهسـتاني گـروه I بـا ـ ـ ـ شماره هاي دسترسـي 469931 KR139961 KR و 859931 KR متفـاوت بودنـد تمـامي ـ ـ ـ ـ جدايهها TYRV اصفهان و چهار محال و بختيار مورد مطالعه در اين پژوهش با درصد بالايي از تشابه ۶ در گروه استرينها t قرار گرفتند تجزيه و تحليل درخت تبارزايي در مورد جدايهها مختلف TSWV و TYRV آشكار كرد كـه ـ هيچگونه ارتباطي بين گروهبند ها و منطقه جغرافيايي و گياهان ميزبان وجود

مجيديان، نرگس

رديابي و شناسايي مولكولي توسپوويروس هاي آلوده كننده ي سبزيجات در منطقه مركزي ايران

ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي , ويروس حلقه زرد گوجه فرنگي , ويروس لكه مرده گل حنا , نوكلئوكپسيد , تنوع ژنتيكي