رديابي و شناسايي مولكولي مهمترين ويروس هاي آلودكننده ي آلسترومريا با علايم موزاييكي در استان اصفهان

چكيده فارسي :

چكيده آلسترومريا Alstroemeria spp گياهي تك لپه اي متعلق به راسته ي سوسن ها Liliales و خانوادهي آلسترومرياسه Alstroemeriace ميباشد آلسترومريا بومي امريكاي جنوبي است و به عنوان يكي از مهمترين گياهان زينتي شاخه بريده در ايران و جهان محسوب ميشود با توجه به اين كه آلسترومريا از طريق ريزوم تكثير مي يابد بيماري هاي ويروسي خسارت زيادي را به اين گياه وارد مي آورند و تشخيص و كنترل عوامل بيماري زاي ويروسي در آن از اهميت زيادي برخوردار است عاليم موزاييكي از جمله عاليم شايع در مراكز توليد اين گياه ميباشد تاكنون برروي جنس آلسترومريا بيش از 15 گونه ويروسي گزارش شده است مهمترين ويروس آلوده كننده آلسترومريا ويروس موزاييك آلسترومريا Alstroemeria mosaic virus AlsMV مي باشد علي رغم شيوع عاليم موزاييكي برروي آلسترومريا در بسياري از گلخانههاي پرورش دهندهي اين گياه در ايران كار تحقيقي جامعي برروي عوامل ايجاد كننده آن صورت نگرفته است از اين رو طي سالهاي 3335 4335 از مراكز توليد و فروش گياه آلسترومريا در استانهاي اصفهان و چهارمحال و بختياري نمونههاي داراي عاليم موزاييك روي برگ در سه تيپ شامل زردي بين رگبرگها موزاييك معمولي و خطوط كلروتيك جمعآوري و RNA كل به روش ليتيوم كلرايد و DNA كل به روش موري و تامسون از آنها استخراج گرديد محصول استخراج RNA جهت رديابي ويروس موزاييك آلسترومريا Alstroemeria mosaic virus AlsMV ويروس ايكس آلسترومريا Youcai mosaic virus YoMV Alstroemeria virus X AlsVX ويروس پژمردگي باقال 2 2 Broad bean wilt virus 2 BBWV ويروس موزاييك خيار Cucumber mosaic virus CMV و ويروس موزاييك فريزيا Freesia mosaic virus FreMV و نيز محصول استخراج DNA جهت رديابي Pepper huasteco yellow vein virus PHYVV مورد استفاده قرار گرفت محصول استخراج RNA با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي گونه و يا جنس ويروسي تحت واكنش RT PCR قرار گرفت همچنين محصول استخراج DNA به طور مستقيم به همراه آغازگرهاي Pepper huasteco متعلق به آن جنس است در PCR مورد استفاده قرار گرفت نتايج حاصل اختصاصي جنس بگوموويروس كه yellow vein virus نشان داد كه تنها باندهاي مورد انتظار 311bp و 311bp مربوط به ويروس موزاييك آلسترومريا به ترتيب با استفاده از جفت آغازگرهاي از PCR 2 MJ1 MJ و MJ1 AnchoroligodT در تعدادي از نمونه ها تكثير شدند قطعات تكثير شده همسانه سازي و جهت توالي يابي به شركت ماكروژن موجود در بانك كره جنوبي ارسال گرديدند بررسي توالي ها با استفاده از نرم افزار بالست نشان دهنده شباهت باالي آن ها با توالي هاي AlsMV ژن بود پس از تاييد نتايج توالي يابي با استفاده از نرمافزار بالست تواليهاي بهدست آمده به همراه تواليهاي ثبت شده در بانك ژن كه شامل دو توالي با طول تقريبي 5311bp و يك توالي با طول 211bp بود جهت طراحي آغازگرهاي اختصاصي مورد استفاده قرار گرفتند از آغازگرهاي طراحي شده جفت آغازگر 2 AlsMf1 AlsMr به عنوان آغازگر مناسب جهت تكثير نواحي پروتيين پوششي NIb و ناحيه غير كدشوندهي انتهاي 3 ژنوم 3 UTR تشخيص داده شد به منظور مقايسه مولكولي جدايههاي ويروس موزاييك آلسترومريا تعداد پنج جدايه بر اساس تيپ عاليم و جدايههاي جمعآوري شده با استفاده از آغازگر AnchoroligodT در واكنش منطقه به نام هاي 5 AS2 AS1 AI2 AD و 4 AS انتخاب شدند cDNA قطعات مورد انتظار با طول تقريبي 5311bp تكثير RT ساخته شد و PCR با جفت آغازگر 2 AlsMf1 AlsMr انجام شد طي واكنش RT PCR گرديدند قطعات تكثير شده همسانهسازي و توالي يابي شدند نتايج حاصل از توالي يابي وجود دو قطعه به طول هاي 5831bp و 5833bp را نشان داد همرديف سازي چندتايي توالي نوكلئوتيدي ژن پروتيين پوششي NIb و ناحيه غير كدشوندهي انتهاي 3 ژنوم جدايههاي اين تحقيق با جدايههاي موجود در بانك ژن به كمك نرمافزار 5 7 CLC Sequence Viewer انجام شد نتايج همرديف سازي نشان داد كه قطعات تكثيري با اندازهي 5833bp نسبت به قطعات تكثيري با اندازهي 5831bp به اندازه84 نوكلئوتيد داراي حذف در ناحيهي 3 UTR ميباشند ميزان متوسط تشابه توالي نوكلئوتيدي ژن پروتيين پوششي NIb و ناحيه غير كدشوندهي انتهاي 3 ژنوم در بين جدايههاي اين تحقيق 8 33 درصد محاسبه گرديد بيشترين و كمترين و جدايه ميزان تشابه به ترتيب بين جدايههاي 5 AD و 2 AI و جدايه ژاپن 1 33 درصد با شماره دسترسي 225851 AB و جدايههاي 1 AS و 2 AS بر اساس توالي تايوان 3 13 درصد با شماره دسترسي 230592 DQ مشاهده شد درخت تبارزايي با استفاده از روش Neighbor joining نوكلئوتيدي ژن پروتيين پوششي NIb و ناحيه غير كدشوندهي انتهاي 3 ژنوم با استفاده از نرمافزار 0 4 DNAMAN رسم گرديد نتايج حاصل نشان داد كه جدايههاي داراي عاليم خطوط كلروتيك و داراي ناحيه 3 UTR كوتاه تر جدايه

تحويلداري، رضا

رديابي و شناسايي مولكولي مهمترين ويروس هاي آلودكننده ي آلسترومريا با علايم موزاييكي در استان اصفهان

پروتيين پوششي , NIb و ناحيه ي غير كدشونده ي انتهاي 3