پديد آورنده :
ايزدي، زهرا
عنوان :
ساخت يك زيست حسگر الكتروشيميايي مبتني بر DNA به منظور تشخيص آلودگي باسيلوس سرئوس و ارزيابي آن در شير خشك نوزاد
گرايش تحصيلي :
علوم و صنايع غذايي
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
دوازده،[122]ص.: مصور،جدول،نمودار
يادداشت :
ص.ع.به فارسي و انگليسي
استاد راهنما :
محمود شيخ زين الدين، صبيحه سليمانيان زاد
استاد مشاور :
علي اصغر انصافي
توصيفگر ها :
واكنش زنجيره اي پليمراز بر خط
استاد داور :
داور خارجي: گيتي امتيازي، اسماعيل شمس; داور داخلي: هاجر شكرچي زاده
تاريخ ورود اطلاعات :
1395/08/15
كد ايرانداك :
ID933 دكتري
چكيده فارسي :
چكيده باكتر گرم مثبت باسيلوس سرئوس عامل دو نوع مسموميت غذايي بنابراين ميشود يافت شده فرآور و خام مواد در كه است شناسايي سريع و دقيق اين باكتر به خصوص در غذا كودك اهميت زياد دارد در اين پژوهش ساخت زيست حسگر بر مبنا DNA تك باكتر باسيلوس رشتها مربوط به ژن اختصاصي بيمار زا nheA سرئوس 97541 ATCC شرح داده شد تثبيت DNA تكرشتها از طريق پيوند تيول رو مغز مداد اصلاح شده با نانوذرات طلا به صورت خود با طلا نانوذرات توزيع و شكل اندازه شد انجام آرايي ميكروسكوپ الكتروني روبشي مشخص شد شناسايي باكتر باسيلوس ۵۴ بر اساس افزايش در مقاومت انتقال بار زيست حسگر سرئوس شد انجام هدف با تكرشته هيبريداسيون دليل به DNA DNA ميكروسكوپ نيرو اتمي جهت تأئيد هيبريداسيون مورد استفاده قرار گرفت حساسيت زيست حسگر در كشت خالص باكتر باسيلوس سرئوس ۵۴ كلني در هر ميليليتر با حد تشخيص ۴ مول بر ليتر به دست آمد زيست حسگر توانايي شناسايي DNA هدف از توالي DNA ناجور را دارد و به طور اختصاصي و ويژه توالي DNA هدف باكتر باسيلوس سرئوس ۵۴ را از ساير باكتر ها موجود در فرآوردهها لبني تشخيص ميدهد همچنين زيست حسگر بر مبنا DNA تكثير پذير و پايدار بالايي دارد در بخش دوم باكتر شناسايي جهت شده طراحي حسگر زيست كارايي مطالعه باسيلوس سرئوس ۵۴ در شير و شير خشك نوزاد اعتبار سنجي شد بدين منظور روش كشت و واكنش زنجيرها پليمراز بر خط به عنوان روشها استاندارد مورد استفاده قرار گرفتند نتايج نشان داد كه زيست حسگر طراحي شده با دقتي مشابه روش واكنش زنجيرها پليمراز تعداد باكتر ها قابل كشت و غير قابل كشت را مشخص مي كند حد تشخيص جهت شناسايي باكتر باسيلوس سرئوس ۵۴ در مورد واكنش زنجيرها پليمراز مشابه زيست حسگر طراحي شده در نمونه ها شير و شير خشك نوزاد كلني بر ميليليتر بدست آمد در
چكيده انگليسي :
Fabrication and Evaluation of a DNA based Electrochemical Biosensor for Detection of Bacillus Cereus in Infant Formula Zahra Izadi Zahra izadi@ag iut ac ir September 3 2016 Department of Food Science and Technology Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 Iran 1st Supervisor M Sheikh Zeinodin zeinodin@cc iut ac ir 2nd Supervisor S Soleimanian Zad soleiman@cc iut ac ir Advisor A A Ensafi ensafi@cc iut ac ir College Graduate Coordinator M M Majidi Associate Professor Department of Food Science and Technology College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan 84156 Islamic Republic of Iran Associate Professor Department of Food Science and Technology College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan 84156 Islamic Republic of Iran Professor Department of Analytical Chemistry College of Chemistry Isfahan University of Technology Isfahan 84156 Islamic Republic of Iran Abstract Bacillus cereus is the causative agent of two types of food borne disease both in raw and processed foods Therefore rapid and accurate detection of B cereus is very important especially in infant formula This study describes fabrication of a based DNA biosensor on single stranded DNA ssDNA of nheA virulence gene in B cereus ATCC 14579 Bc14579 ssDNA was self assembled by thiolar binding on Au nanoparticle modified pencil graphite electrode PGE The size shape and dispersion of the GNPs were characterized by field emission scanning electron microscope FESEM Detection of Bc14579 was carried out based on an increase in the charge transfer resistance Rct of the biosensor due to hybridization of the ssDNA with target DNA Atomic force microscope AFM was used to confirm the hybridization of ssDNA with target DNA The biosensor sensitivity in pure cultures of B cereus was found to be 100 CFU mL with a detection limit of 9 4 10 12 mol L 1 The biosensor could differentiate complementary DNA strand from mismatch DNA sequence and could exclusively and specifically detect the target DNA sequence of B cereus from DNA sequence which can be found in dairy products Moreover the DNA biosensor exhibited high reproducibility and stability thus it could be used as a suitable biosensor to detect B cereus and to become a portable system for food quality control Second part of this study was conducted to validate the performance of a fabricated DNA biosensor to detection of B cereus in milk and infant formula For this purpose both culture and real time PCR as standard methods were used Fabricated DNA biosensor proved to be as accurate as real time PCR when quantitatively analysis culturable and non culturable fraction of Bc14579 The detection limit of both real time PCR and fabricated DNA biosensor in milk and infant formula samples for detection of B cereus ATCC 14579 Bc 14579 was calculated as 100 CFU mL whereas for culture method it was observed to be more than 101 CFU mL
استاد راهنما :
محمود شيخ زين الدين، صبيحه سليمانيان زاد
استاد مشاور :
علي اصغر انصافي
استاد داور :
داور خارجي: گيتي امتيازي، اسماعيل شمس; داور داخلي: هاجر شكرچي زاده
