11713

10745

كارشناسي ارشد

محيط زيست(زيستگاه ها و تنوع زيستي)

اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده منابع طبيعي

1395

يازده،[46]ص.: مصور،جدول،نمودار

ص.ع.به فارسي و انگليسي

منصوره مكيان

محمودرضا همامي

يزدان كيواني، سالاردرافشان

1395/08/16

كتابنامه

مهندسي منابع طبيعي

ID10745

چكيده روشهاي مرسوم براي تعيين حضور يا عدمحضور يك گونه در محيطهاي طبيعي مستلزم كار صحرايي و مشاهده مستقيم گونه بودهاست كه در كنار مشكالت و محدوديتهاي زياد صرف زمان و هزينه زيادي را نيز طلب ميكند امروزه در راستاي صرفهجويي در هزينه و زمان براي بررسي حضور يا عدمحضور يك گونه در محل از روش دي ان ا محيطي يا eDNA استفاده ميشود كه در آن DNA به طور مستقيم از بافت و اندامهاي بدن جاندار استخراج نشده بلكه DNA از نمونههاي محيطي مثل نمونه آب استخراج ميشود در اين مطالعه امكان استفاده از اين رويكرد در تعيين حضور و عدم حضور گونه نادر سمندر لرستان Neurergus kaiseri در زيستگاه طبيعي آن مورد بررسي قرار گرفت پس از مطالعات ميداني اوليه 59 ميليليتر نمونه آب از 49 سايت حضور و عدم حضور گونه جمعآوري و بالفاصله نمونه ها با استفاده از اتانول و سديم استات تثبيت گرديد و در فريزر نگهداري شد پس از انتقال نمونههاي تثبيت شده به آزمايشگاه استخراج DNA آن با استفاده از كيت Iraizol شركت زيست فناوران رانا انجام شد در مرحله بعد با استفاده از فن PCR و با استفاده از آغازگر اختصاصي سمندر لرستان قطعهاي از ژنوم سيتوكروم b گونه به طول 713 باز آلي تكثير و حضور يا عدمحضور گونه بر اساس مشاهده محصول PCR روي ژل تعيين گرديد در نهايت با مقايسه نتايج بدست آمده از PCR و حضور و عدم حضور واقعي صح ت و دقت نتايج تعيين گرديد نتايج نشان داد كه روش eDNA از 49 سايت موجود 1 سايت حضور و 8 سايت عدم حضور را به درستي تشخيص داد كه موفقيت 27 در اين روش نشان ميدهدكه رويكرد eDNA ميتواند در تعيين حضور و عدم حضور گونههاي نادر همچون سمندر لرستان در زيستگاههاي مختلف با فراواني متفاوت مورد استفاده قرار بگيرد كلمات كليدي حضور و عدم حضور سمندر لرستان لرستان eDNA Neurergus kaiseri نمونهمحيطي

45Application of eDNA for detecting presence of Luristan newt in aquatic environments Parisa Sadeghi p sadeghi@na iut ac ir September 18 2016 Department of Natural Resources Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 Iran Degree MSc Language Persian Mansoureh Malekian mmalekian@cc iut ac irAbstractTraditional techniques to detect the presence and absence of species in natural environmentsrequire field based visual surveys which are time consuming and costly In recent years environmental DNA eDNA has emerged as a new tool which can reduce the cost and time and isa good complement for visual surveys In this method DNA is not isolated from tissues of liveindividuals but from environmental samples such as water This method is used in the current studyto investigate the presence and absence of the Luristan newt Neurergus kaiseri in its naturalhabitats After an initial field survey we selected 14 presence and absence sites and three 15 mlwater samples from each site were collected Water samples were instantly fixed by adding 1 5 mlof sodium acetate 3M and 33 ml absolute ethanol and stored in freezer DNA was extracted usingIraiZol Kit RNA Biotech then species specific primers were used in polymerase chain reactionto amplify a 307 bp fragment of the Cytochrome b gene PCR products were visualized usingelectrophoresis on 2 agarose gel Results were compared with the field observations to define theaccuracy of the eDNA method This method could successfully detect the species at 9 sites from 11presence sites and also did not detect the Luristan newt at the two absence sites with an overall78 accuracy Our results suggest that environmental DNA offers great potential for use indetecting presence and absence of rare and secretive species such as Luristan newt in variousecosystems Key words species presence and absence Neurergus kaiseri eDNA Environmental samples

منصوره مكيان

محمودرضا همامي

يزدان كيواني، سالاردرافشان