پديد آورنده :
راستي بروجني، امين
عنوان :
خالص‌سازي آنزيم سوپراكسيد ديسموتاز با كروماتوگرافي ژلي
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
گرايش تحصيلي :
فرايندهاي جداسازي
محل تحصيل :
اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان
صفحه شمار :
ده،87ص. :مصور،جدول،نمودار
استاد راهنما :
كيقباد شمس
استاد مشاور :
حميد زيلويي، آذر شاه پيري
توصيفگر ها :
خالص‌سازي , كروماتوگرافي ژلي , آنزيم سوپراكسيد ديسموتاز , روش تاگوچي
تاريخ ورود اطلاعات :
1398/04/15
رشته تحصيلي :
مهندسي شيمي
تاريخ ويرايش اطلاعات :
1398/04/15
چكيده فارسي :
چکیده از مهمترین عوامل بیماریزا افزایش وجود رادیکالهای آزاد ROS در بافتهای انسانی است که با اکسید کردن درشت مولکولهای بدن بهتدریج باعث پیدایش بیماریهای قلبی عروقی و سرطان میشوند با توجه به اهمیت حفظ تعادل احیایی درون سلول سلولها شامل شبکهای از مکانیسمهای دفاع آنتیاکسیدانی هستند که مانع فعالیت رادیکالهای آزادشده و از اکسیداسیون آنها جلوگیری میکنند و با غیرفعال کردن آنها سلولهای بدن را از اثرات مخرب این ترکیبات مصون میدارند یکی از مهمترین مکانیسمهای آنتیاکسیدانی بدن در برابر حمله گونههای فعال اکسیژن حضور و فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز است این آنزیم بهصورت اختصاصی واکنش دیسموتاسیون آنیون سوپراکسید به اکسیژن و پراکسید هیدروژن را کاتالیز میکند سوپراکسید دیسموتاز بهطور گسترده در گیاهها و حیوانها یافت میشود هدف از این پژوهش استخراج و خالصسازی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز از بافت ارزانقیمت و در دسترس جگر مرغ است بهطورکلی جداسازی مواد حلشده و حلنشده از محلولهای رقیق دشوار است برای برخی از مواد مانند پروتئینها و آنزیمها این مشکل به دلیل حساس بودن در برابر تغییرات شرایط عملیاتی جدیتر میشود متأسفانه یک روش ایدهآل برای خالصسازی پروتئینها وجود ندارد و معموال خالصسازی آنها شامل عملیات چندمرحلهای است که با از دست دادن مقدار زیادی از فعالیت آنزیمها همراه است خالصسازی با کروماتوگرافی ژلی روش پیشنهادی ما در این پژوهش است که ضمن به حداقل رساندن مراحل فرآیند بازده خالصسازی را حفظ کرده و تلفات فعالیت آنزیمها را کاهش میدهد طبق مطالعات انجامشده اطالعات زیادی برای خالصسازی این آنزیم با کروماتوگرافی ژلی از جگر مرغ در دست نیست تأثیر پارامترهای مختلف بر خالصسازی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز توسط محققین موردبررسی قرارگرفته است اما در این پژوهش پارامترهای pH طول ستون کروماتوگرافی دبی جریان حالل عبوری و غلظت نمک آمونیوم سولفات جهت رسوب دادن محلول پروتئینی برای دو نوع ژل کروماتوگرافی سفادکس 57 G و001 G بهعنوان پارامترهای مؤثر در میزان خالصسازی در نظر گرفته شد انجام آزمایشهای زیاد همواره متضمن صرف هزینه و زمان بسیار است به همین منظور از طراحی آزمایش به روش تاگوچی استفاده شد میزان فعالیت آنزیم در شرایط مختلف خالصسازی سنجیده شد مقادیر 8 pH طول ستون 30cm دبی جریان 60 ml hr و غلظت 06 درصد وزنی نمک آمونیوم سولفات جهت رسوب عصاره اولیه حاوی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز برای هر دو نوع سفادکس استفادهشده بیشترین نسبت بازیابی نسبت بازیابی 12 204 برای سفادکس 57 G و 91 506 برای سفادکس 001 G را نتیجه داد جهت بررسی عملکرد خالصسازی و عدمتغییر ماهیت آنزیم از الکتروفورز استفاده شد نتایج حاصل از الکتروفورز نشان داد که آنزیم فعالیت خود را از دست نداده است واژههای کلیدی خالصسازی کروماتوگرافی ژلی آنزیم سوپراکسید دیسموتاز روش تاگوچی
چكيده انگليسي :
Purification of Superoxide dismutase enzyme by gel chromatography Amin Rasti Borujeni amin rasti@ce iut ac ir Department of chemical engineering Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 IranDegree M Sc Language FarsiSuperviser K Shams Professor k shams@cc iut ac irAbstract The most important pathogens are the increase of free radicals ROS in human tissuesthat gradually causes cardiovascular diseases and cancer by oxidizing large molecules of thebody Considering the importance of maintaining a regenerative balance in cells theyinclude a network of anti oxidant defense mechanisms that inhibit the activity of free radicalsand prevent them from oxidation and by deactivating them immune cells to the damagingeffects of these compounds One of the most important antioxidant mechanisms of the bodyagainst the attack of reactive oxygen species is the presence and activity of superoxidedismutase enzyme This enzyme in particular catalyzes the reaction of superoxide aniondismutase to oxygen and hydrogen peroxide Superoxide dismutase is widely found in plantsand animals The purpose of this research is also to extract and purify the superoxide dismutase enzymefrom inexpensive and accessible chicken livers In general the removal of dissolved andnon soluble substances from diluted solutions is difficult For some materials such asproteins and enzymes this problem becomes more serious due to the sensitivity to changesin operational conditions Unfortunately there is no ideal method for the purification ofproteins and usually its purification includes a multi stage operation that involves losing alot of enzyme activity The method of purification with gel chromatography is our proposedmethodology in this study which in addition to minimizing process stages retains theefficiency of purification and reduces the loss of enzymes activity According to studies there is not much information available to purify this enzyme with gel chromatography ofchicken livers The effect of different parameters on the purification of superoxide dismutase enzyme hasbeen investigated by researchers but in this study pH chromatography column length flowrate of transmission solvent and the concentration of ammonium sulfate salt for depositionof protein solution parameters was considered for two types of G75 and G100 Sephadex gelchromatography as an effective parameter in the amount of purification Performing hightests always involves spending a lot of time and cost so that the experiment design was usedby Taguchi method Enzyme activity was measured in different conditions of purification The values of pH 8 30 cm length column flow rate of 60 ml hr and 60 w v of ammoniumsulfate salt for the sedimentation of initial extract containing superoxide dismutase enzymefor both types of used Sephadex resulted in the maximum recovery ratio 402 21 recoveryratio for G75 and 605 19 for G100 Electrophoresis was used to evaluate the performanceof purification and maintaining enzyme nature The results of the electrophoresis showedthat the enzyme did not lose its activity Keywords Purification Gel chromatography Superoxide dismutase Enzyme Taguchimethod
استاد راهنما :
كيقباد شمس
استاد مشاور :
حميد زيلويي، آذر شاه پيري
