شماره راهنما :
1437 دكتري
پديد آورنده :
زارعي، صنعان
عنوان :
ساخت آپتاحسگر الكتروشيميايي جهت رديابي شيگلا ديسانتري در شير و آب
گرايش تحصيلي :
علوم و صنايع غذايي
محل تحصيل :
اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان
صفحه شمار :
چهارده، [116]ص.: مصور، جدول، نمودار
استاد راهنما :
صبيحه سليمانيان زاد
استاد مشاور :
علي اصغر انصافي
توصيفگر ها :
شيگلا ديسانتري PTCC 1118 , نانو ذرات طلا , الكترود كربن شيشه اي اصلاح شده با DNA , امپدانس الكتروشيميايي , ولتامتري چرخه اي , واكنش زنجيره اي پليمراز بر خط
استاد داور :
جمال مشتاقيان، اسماعيل شمس سولاري، بهزاد رضايي، هاجر شكرچي زاده
تاريخ ورود اطلاعات :
1398/06/26
رشته تحصيلي :
علوم و صنايع غذايي
تاريخ ويرايش اطلاعات :
1398/06/26
چكيده فارسي :
چکیده در این رساله یک آپتاحسگر جدید و حساس مبتنی بر امپدان الکتروشمممایی براي باکتري شمگلا دیسانتري PTCC 8111 طراحی شد براي ساخت آپتاحسگر نانوذرات طلا بهروش ترسمب الکتروشمممایی روي الکترود کربن شمشهاي تثبمت شد سپ آپتامر تمولدار شده بهصورت خودآرایی بر روي الکترود کربن شمشهاي اصلاح شده با نانوذرات طلا قرار گرفته و پ از آن نانوذرات آزاد موجود در سطح بهوسملهي ترکمب 6 مرکاپتو 1 هگزانول پوشش داده شدند اندازه شکل و توزیع نانوذرات طلا با ممکروسکوپ الکترونی روبشی بررسی شد ردیابی باکتري شمگلا دیسانتري بهوسملهي افزایش مقاومت انتقال بار آپتاحسگر انجام شد و نمز ممکروسکوپ نمروي اتمی جهت تایمد این امر مورد استفاده قرار گرفت برهمکنش بمن آپتامر و پروتئمنهاي غشاي خارجی باکتري شمگلا دیسانتري باعث افزایش مقاومت انتقال بار می شوند آپتاحسگر طراحی شده داري حد شناسایی 001 کلنی بر مملیلمتر بوده و نمز دامنهي خطی 101 تا 601 کلنی بر مملی لمتر در کشت خالص باکتري شمگلا دیسانتري براي آن بهدست آمد انتخابپذیري آپتاحسگر نمز مورد بررسی قرار گرفت نتایج نشان داد که آپتاحسگر طراحی شده سلولهاي زندهي باکتري شمگلا دیسانتري را از دیگر پاتوژنهاي مورد بررسی تشخمص میدهد بهعلاوه سلولهاي مردهي باکتري شمگلا دیسانتري نمیتوانند در انتخابپذیري آپتاحسگر دخالتی داشته باشند کارایی آپتاحسگر طراحیشده جهت ردیابی شمگلا دیسانتري بهوسملهي روش کشت ممکروبی و واکنش زنجمرهاي پلممراز بر خط اعتبارسنجی شد نتایج نشان میدهد که آپتاحسگر طراحی شده با دقتی مشابه روش واکنش زنجمرهاي پلممراز ردیابی باکتري هدف را انجام میدهد حد تشخمص واکنش زنجمرهاي پلممراز بر خط جهت شناسایی باکتري شمگلا دیسانتري 001 کلنی بر مملیلمتر بهدست آمد در حالمکه این مقدار در مورد روش کشت ممکروبی بمش از 101 کلنی بر مملیلمتر میباشد آپتاحسگر طراحی شده سریع کمهزینه بسمار حساس و در ردیابی گونهي هدف داراي عملکرد انتخابی میباشد و از اینرو میتواند بهعنوان یک ابزار کنترل کمفمت غذایی مناسب پمشنهاد شود شمر خام بدون چربی شمر پاستوریزه بدون چربی شمر پرچرب و چند نمونه آب بهوسملهي باکتري شمگلا دیسانتري آلوده شده و بهعنوان نمونههاي حقمقی مورد آزمون قرار گرفتند مطالعات بازیابی تایمدکنندهي عملکرد خوب آپتاحسگر در نمونههاي حقمقی بدون چربی بود ولی آپتاحسگر طراحیشده نتوانست در نمونههاي شمر پرچرب شمگلا دیسانتري را ردیابی و شناسایی کند با توجه به مهاجرت گلبولهاي چربی شمر به سطح آپتاحسگر و اختلال در ردیابی باکتري هدف تاممم گرفته شد پمشتمماري جهت حذف حداکثري چربی شمر با احتراز از آسمب به جمعمت ممکروبی آن مورد مطالعه قرار گمرد از بمن روشهاي مختلف حذف چربی دو روش استخراج سرد با حلالهاي آلی و روش استفاده از نمروي گریز از مرکز مورد بررسی قرار گرفت سمستمهاي حلال آلی مورد استفاده به جمعمت شمگلا دیسانتري در مبمط شمر آسمب وارد کردند بنابراین گزینهي مناسبی براي این امر نبودند نتایج مطالعات اولمه نشان داد که از ممان روشهاي حذف چربی مورد مطالعه استفاده از سانتریفوژ روش مناسبتري است با استفاده از طرح مرکب مرکزي بهوسملهي روش سطح پاسخ شرایط زمان و نمروي سانتریفوژ بهمنه شده و بهصورت عملی نمز تایمد شد چندین نمونه شمر پرچرب آب چاه آب چشمه فاضلاب و گوشت چرخ کرده با آپتاحسگر مورد ارزیابی قرارگرفتند و نمونههاي داراي آلودگی شمگلا دیسانتري بهوسملهي روشهاي کشت ممکروبی و آزمونهاي بموشمممایی تکمملی و همچنمن واکنش زنجمرهاي پلممراز مورد بررسی نهایی قرار گرفتند در نهایت انجام این رساله توانست مسئلهي استفاده از آپتاحسگر بر مبناي امپدان را براي ردیابی و ارزیابی کمفی مواد غذایی که میتوانند منبع ورود شمگلا دیسانتري به بدن انسان باشد را حل کند کلمات کلیدی شمگلا دیسانتري 8111 PTCC نانو ذرات طلا الکترود کربن شمشهاي اصلاح شده با DNA امپدان الکتروشمممایی ولتامتري چرخهاي واکنش زنجمرهاي پلممراز بر خط 1
چكيده انگليسي :
Development of an electrochemical aptasensor for detection of Shigella dysenteriae in contaminated water and milk Seyed Sanaan Zarei sanaan zarei@ag iut ac ir July 29 2019 Department of Food Science and Technology Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 IranSupervisor Sabihe Soleimanian Zad soleiman@cc iut ac ir Professor of Food Microbiology Department of Food Science and Technology College of Agriculture Isfahan University of TechnologyAbstractThis work introduces a novel sensitive aptasensor developed for S dysenteriae as oneof the most important foodborne pathogens For fabrication of the aptasensor goldnanoparticles GNPs were electrodeposited on a glassy carbon electrode GCE surface Then thiolar aptamer were self assembled with GNPs GCE and free GNPs werecovered by 6 mercapto 1 hexanol MCH Size morphology and distribution of theGNPs were characterized by field emission scanning electron microscope FE SEM Detection of S dysenteriae was performed using charge transfer resistance Rct of theaptasensor and it was also confirmed by atomic force microscopy The interactionbetween the aptamer and outer membrane proteins of S dysenteriae lead to an increasein the Rct The fabricated aptasensor has a wide linear dynamic range at a concentrationrange of 101 106 CFU mL 1 with a limit of detection LOD of 100 CFU mL 1 Theselectivity of this reproducible aptasensor was examined The aptasensor candifferentiate between alive S dysenteriae and other pathogens and also dead S dysenteriae cells don t have any effect on the aptasensor selectivity The aptasensorresponses for S dysenteriae detection were validated by real time PCR The resultsdemonstrate that the fabricated aptasensor is as accurate as real time PCR in targetbacteria detection The detection limit of real time PCR for detection of S dysenteriaewas determined as 100 CFU mL 1 whereas this value was obtained more than 10 CFUmL 1 for culturing method The proposed aptasensor is a quick low cost ultrasensitive and a specific sensor for detecting its target Hence it represents a valuable tool in foodquality control Unpasteurized and pasteurized skim milk full fat milk and some watersamples were contaminated with target bacterium and examined as real samples Recovery studies indicated the good performance of the aptasensor in fatless realsamples but the aptasensor couldn t be able to detect target bacterium in full fat milk Due to the migration of milk fat golebules to the surface of the aptasensor and alsodisturbance in the target detecting a pretreatment was taken to remove the maximum 101
استاد راهنما :
صبيحه سليمانيان زاد
استاد مشاور :
علي اصغر انصافي
استاد داور :
جمال مشتاقيان، اسماعيل شمس سولاري، بهزاد رضايي، هاجر شكرچي زاده
