15714

14039

كارشناسي ارشد

علوم و صنايع غذايي

اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان

1398

سيزده،103ص.:مصور، جدول، نمودار

سليمانيان زاد صبيحه، جلالي سيد امير حسين

محمدي نژاد رضوان، علافچيان عليرضا

شكرچي زاده هاجر، ابراهيمي عيسي

1399/06/05

كتابنامه

مهندسي كشاورزي

مهندسي كشاورزي

1399/06/05

2623064

چكيده ماهي قزل آالي رنگين كمان به دليل داشتن پروتئين اسيدهاي چرب غير اشباع ويتامين و ريز مغذيها بر سالمتي انسان اثرات قابل توجهي دارد با اين وجود مصرف ماهي قزل آالي رنگين كمان حاوي باقيمانده ماالشيت گرين كه عنوان ماده ضدعفوني كننده در مزارع پرورش ماهي استفاده ميشود خطر ابتال به سرطان را تشديد ميكند روشهاي تشخيص ماالشيت گرين شامل روشهاي كروماتوگرافي مايع با كارايي باال و االيزاي مستقيم وغير مستقيم است استفاده از اين روشها با برخي محدوديتها از جمله زمانبر بودن آزمون مراحل سخت هزينه باال ونياز به نيروي متخصص همراه است در نتيجه توسعه روشهاي تشخيصي با دقت حساسيت و سرعت باال ضروري است زيست حسگر يك دستگاه تجزيه اي است كه شامل قسمت تشخيص زيستي و مبدل فيزيكي است كه سيگنال قابل اندازه گيري را نسبت به غلظت تركيب هدف آناليت ايجاد ميكند زيست حسگرهاي مبتني بر آپتامر ابزارهايي هستند كه مي توانند از آپتامرها به عنوان گيرنده ي زيستي استفاده نموده و آناليت هدف را شناسايي كنند اتصال آپتامر به آناليت هدف توسط يك مبدل به سيگنال قابل اندازه گيري تبديل ميشوند هدف از اين پژوهش انتخاب آپتامر DNA براي طراحي زيست حسگر به منظور رديابي ماالشيت گرين در بافت گوشت ماهي قزل آالي رنگين كمان پرورشي است در راستاي نيل به اين هدف ابتدا ماالشيت گرين بر نانوذرات آهن آلژينات در شرايط بهينه دما pH و بافر نمكي تثبيت شد به منظور انتخاب آپتامرهاي اختصاصي نانو ذرات آهن آلژينات ماالشيت گرين به عنوان هدف در فرآيندي به نام تكامل سيستماتيك ليگاندها از طريق غني سازي تصاعدي يا SELEX مورد استفاده قرار گرفت اين فرايند شامل پنج مرحله ي 1 انكوباسيون و اتصال مجموعه قطعات آپتامر به مولكول هدف 2 تفكيك قطعات متصل شده به مولكول هدف از ساير قطعات اتصال نيافته 3 جداسازي قطعات متصل شده به مولكول هدف 4 تكثير قطعات به دست آمده با استفاده از واكنش 5 PCR توليد مجدد قطعات تك رشته براي شروع دور بعدي SELEX در سيزده دور متوالي تكرار شد مجموعه قطعات حاصل از دور سيزدهم SELEX در ناقل 91 pTG همسانه سازي و توالييابي شد بر اساس نتايج قطعات آپتامر دور سيزدهم SELEX به هفت گروه مجزا تقسيم شدند بر اساس آزمون درصد اتصال سه آپتامر 3 MG A19 MG A و MG 01 B از توانايي اتصال صد در صد براي ماالشيت گرين برخوردار بودند بررسي اختصاصيت سه قطعه آپتامر نشان داد آپتامر 91 MG A بيشترين اختصاصيت را براي ماالشيت گرين و فرم احيايي آن لوكوماالشيت گرين داشته و كمترين برهمكنش را با تركيبات مشابه كريستال ويوله و غير مشابه نانوذره آهن آلژينات دارد در نتيجه قطعه مذكور براي طراحي زيستحسگر ميكروباالنس كريستال كوارتز QCM استفاده شد در اين زيست حسگر تغييرات اندك جرم به واسطه ي كاهش فركانس كريستال كوارتز قابل اندازه گيري مي باشد آپتامر 91 MG A با استفاده از آغازگر بيوتينه تكثير شد و به واسطهي استرپتاويدين بر سطح كريستال كوارتز زيست حسگر تثبيت شد حد تشخيص ماالشيت گرين توسط زيست حسگر طراحي شده 2 0 نانو گرم بر ميليليتر به دست آمد همچنين درصد بازيابي ماالشيت گرين از بافت ماهي توسط زيست حسگر ميكروباالنس كريستال كوارتز 49 به دست آمد كه حاكي از دقت و كارايي باالي آن براي تشخيص ماالشيت گرين از بافت ماهي است نتايج اين پژوهش نشان داد زيست حسگر QCM مبتني برآپتامر ميتواند به عنوان روش تشخيصي سريع اختصاصي و با حساسيت باال براي اندازه گيري ماالشيت گرين در بافت ماهي قزل آالي رنگين كمان پرورشي به كار برده شود كلمات كليدي ماهي قزل آالي رنگين كمان زيست حسگر ميكروباالنس كريستال كوارتز آپتامر SELEX 51

77 Mitrowska K Posyniak A and Zmudzki J 2007 The effects of cooking on residues of malachite green and leucomalachite green in carp muscles Anal Chim Acta 586 420 425 78 Muraleedharan V Antony K P and Perigreen P A 1996 Utilization of unconventional fish resources for surimi preparation Proceeding of the second workshop on scientific results of FORV SAGAR sampada dept of ocean development New Delhi Abstract 79 Mohammadi A Daemi H and Barikani M 2014 Fast removal of malachite green dye using novel superparamagnetic sodium alginate coated Fe3O4 nanoparticles Int J Biol Macromol 69 447 455 80 Morris M C Evans D A and Bienias J L 2003 Consumption of fish and n 3 fatty acids and risk of incident Alzheimer disease Arch Neurol 60 7 940 6 81 Nelson N C 1974 A review of the literature on the use of malachite green in fisheries V S National Technical Information Service Washington D C Document 82 Niazi J H Lee S J and Gu M B 2008 Single stranded DNA aptamers specific for antibiotics tetracyclines Bioorg Med Chem 16 7245 53 83 Nurerk P Kanatharana P and Bunkoed O 2017 Polyaniline coated magnetite nanoparticles incorporated in alginate beads for the extraction and enrichment of polycyclic aromatic hydrocarbons in water samples Int J Environ Anal Chem 97 145 158 84 Rajh T Chen L X Lukas K Liu T Thurnauer M C and Tiede D M 2002 Surface restructuring of nanoparticles An efficient route for ligand metal oxide crosstalk J Phys Chem B 106 10543 10552 85 Ramel A Martin z A and Kiely M 2008 Beneficial effects of long chain n 3 fatty acids included in an energy restricted diet on insulin resistance in overweight and obese European young adults Diabetologia 51 7 1261 8 86 Ramel A Martinez J A and Kiely M 2010 Effects of weight loss and seafood consumption on inflammation parameters in young overweight and obese European men and women during 8 weeks of energy restriction Eur J Clin Nutr 64 9 987 93 87 Rehana D Haleel A K and Rahiman A K 2015 Hydroxy carboxylic and amino acid functionalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles Synthesis characterization and in vitro anti cancer studies J Chem Sci 127 1155 1166 88 Sambrook J and Russell D W 2001 Molecular Cloning A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Prees New York 100

سليمانيان زاد صبيحه، جلالي سيد امير حسين

محمدي نژاد رضوان، علافچيان عليرضا

شكرچي زاده هاجر، ابراهيمي عيسي