پديد آورنده :
مسائلي، مهسا
عنوان :
انكپسوله كردن فرم نوتركيب آنزيم سوپراكسيد ديسموتاز گياه حرا با الژينات به منظور بررسي رهايش و پايداري آن در سيستم گوارشي شبيه سازي شده جوجه
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
گرايش تحصيلي :
بيوتكنولوژي
محل تحصيل :
اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان
صفحه شمار :
دوازده، 67ص. : مصور، جدول، نمودار
توصيفگر ها :
نانو ذره آلژينات , آنزيم آنتي اكسيدان , سوپر اكسيداز ديسموتاز , انكپسوله كردن , رهايش و پايداري در سيستم گوارشي
تاريخ ورود اطلاعات :
1402/01/16
تاريخ ويرايش اطلاعات :
1403/04/03
چكيده فارسي :
سوپر اكسيد ديسموتاز (SOD) يك آنزيم آنتي اكسيدان است كه براي دفاع فيزيولوژيكي در حيوانات و گياهان در برابر راديكال هاي آزاد و گونه هاي اكسيژن واكنش پذير (ROS) توليد شده از استرس هاي غيرزنده و زنده كارايي فراواني دارد. مكمل سوپر اكسيد ديسموتاز از گياهان در رژيم غذايي پستانداران يك روش جديد از نظر بهبود سلامت در برابر شرايط پاتوژيك مي باشد. راديكال هاي آزاد و گونه هاي اكسيژن فعال اصطلاحات رايجي هستند كه مربوط به پاتوفيزيولوژي سرطان، ديابت، سميت كبدي، ارتروز و بسياري از بيماري هاي شديد ديگر مي شود (گونه هاي فعال اكسيژن) شبيه شمشيرهاي دو لبه است كه مي تواند تكثير سلولي را تنظيم كند يا منجر به آپوپتوز و مرگ سلولي مي شود. حفظ تعادل در غلظت گونه هاي فعال اكسيژن درون سلولي و خارج سلولي مهم مي باشد. هدف از اين پژوهش و تحقيق انكپسوله كردن فرم توتركيب آنزيم سوپراكسيد ديسموتاز (SOD) گياه حرا با آلژينات به منظور بررسي رهايش و پايداري آن در سيستم گوارشي شبيه سازي شده جوجه مي باشد. بدين منظور سويه R-AmSOD1 كه قبلا با انتقال ژن كد كنند AmSOD1Am از گياه حرا به باكتري E.coli (DE3) ساخته شده بود و قابليت توليد آنزيم AmSOD1 را داشت در محيط مناسب كشت داده شد و پس از القا با IPTG اين پروتئين توليد شد. با استفاده از كروماتوگرافي تمايلي اين آنزيم خالص سازي شد و سپس به منظور حذف نمك ايميدازول دياليز صورت گرفت. از طرفي نانو ذره با سديم آلژينات با غلظت (2 ميلي گرم بر ميلي ليتر) با حضور يون كليسيم توليد شد. جهت بارگيري آنزيم فرايند توليد نانودره به همراه پروتئين خالص سازي شده صورت گرفت. به اين ترتيب نانوذرات شاهد ( بدون بارگيري) و نانوذرات بارگيري شده توليد شد. با توجه به كم بودن مقدار آنزيم بارگيري شده با تغييراتي مانند تغيير در غلظت كلسيم مقدار آنزيم بارگيري شده حتي به 50 درصد نيز رسيد. براي بررسي رهايش آنزيم از ورنال بافركه عمدتا جهت سيستم شبيهسازي شده در مرغ مورد استفاده قرار مي گيرد استفاده شد. اين بافر در pH هاي مختلف تهيه گرديد. مقدار رهايش در pH هاي اسيدي در حدود 3 الي 4 درصد بود در حالي كه اين مقدار در pH 5/7 به مقدار 20 درصد افزايش يافت. افزايش رهايش در pH 5/7 كه مطابق با pH در روده جوجه مي باشد نشان مي دهد كه نانوساختار به دست آمده به عنوان يك پوشش مناسب براي انكپسوله كردن پروتئين مي باشد.اين تحقيق مقدمه خوبي براي تحقيقات بعدي در خصوص استفاده از سوپر اكسيد ديسموتاز به عنوان مكمل غذايي در جانوران فراهم مي كند.
چكيده انگليسي :
Superoxide dismutase (SOD) is an antioxidant enzyme that is very effective for physiological defense in animals and plants against free radicals and reactive oxygen species (ROS) produced by non-living and living stresses. Supplementing SOD from plants in the diet of mammals is a new way to improve health against pathogenic conditions. Free radicals and reactive oxygen species are common terms associated with the pathophysiology of cancer, diabetes, cobra poisoning, osteoarthritis, and many other severe diseases. Apoptosis and cell death. Maintaining balance in intracellular and extracellular ROS concentration is important. The purpose of this research is to encapsulate the combined form of superoxide dismutase (SOD) enzyme of mangrove plant with alginate in order to check its release and stability in the simulated digestive system of chicken. For this purpose, the R-AmSOD1 strain, which was previously encoded by transferring the AmSOD1 gene from the mangrove plant to E.coli (DE3) bacteria, and had the ability to produce the AmSOD1 enzyme, was cultured in a suitable medium and after induction with IPTG, this protein was produced. Then this enzyme was purified by affinity chromatography and dialyzed to remove imidazole salt. On the other hand, nanoparticles were produced with sodium alginate with a concentration (2 mg/ml) in the presence of calcium ions. In order to load the enzyme, the entrapment of enzyme was carried out along with the purified protein. In this way, control nanoparticles (unloaded) and loaded nanoparticles were produced. Despite the low amount of loaded enzyme, with changes such as changes in calcium concentration, the amount of loaded enzyme even reached over 50%. To check the release of the enzyme, vernal buffer was used, which is mainly used for the simulated digestion system in chichen. This buffer was prepared at different pH levels. Whereas the amount of release was around 3-4% in acidic pH, this amount increased to 20% in pH 7.5. The increase in release at pH 7.5, which corresponds to the pH in the chicken intestine, shows that the obtained nanostructure is a suitable medium for protein encapsulation. This research is a good introduction for further research on the use of SOD as a Provides food supplement in animals.
استاد راهنما :
آذر شاه پيري , عباس حاجي زاده
استاد داور :
مجيد طالبي , اميرحسين مهدوي
