توصيفگر ها :
خار مريم , سيلي مارين , كالوس , متيل جاسمونات , ساليسيليك اسيد , بيان ژن
چكيده فارسي :
خارمريم يا مارتيغال گياهي از خانواده Asteraceae است. اين گياه به عنوان يكي از گياهان داروئي و روغني بسيار مهم در جهان است. اهميت اين گياه به دليل داشتن نوعي فلاونوليگنان به¬نام سيلي¬مارين است كه داراي اثر داروئي براي مداواي بيماري¬هاي معده، روده، طاعون و همچنين با اثرات آنتي اكسيداني سبب حفاظت از سلول¬هاي عصبي، لوزالمعده و كليه¬ها مي¬شود. اثر داروئي اين گياه به¬صورت درمان خاص براي بيماري¬هاي كبدي مورد استفاده قرار مي¬گيرد. استفاده از كشت بافت و سلول گياهي ابزاري قدرتمند براي توليد متابوليت¬هاي ثانويه محسوب مي¬شود. در اين پژوهش تلاش شد تا مقدار اين متابوليت ثانويه در كشت سوسپانسيون با استفاده از اليسيتورهاي متيل جاسمونات و ساليسيليك اسيد افزايش يابد. بدين منظور در ابتدا كالوس زائي با استفاده از قطعات برگي اين گياه تحت تيمار با غلظت¬هاي مختلف از تنظيم كننده¬هاي رشد كينتين، 4-D،2 و پيكلورام القا شد. بهترين كالوس¬ها از لحاظ صفات تعداد، وزن تر و مساحت در محيط حاوي 8/0 ميلي گرم بر ليتركينيتن، 1/0 ميلي گرم بر ليتر 4-D،2 و 2 ميلي گرم بر ليتر پيكلورام به¬دست آمد. پس از بهينه سازي كشت سوسپانسيون با غلظت هاي مختلف از اليسيتور هاي متيل جاسمونات و ساليسيليك اسيد، طي زمان¬هاي شش ساعت، سه روز و شش روز نمونه برداري از سلول هاي در حال رشد انجام شد. اندازه گيري مقدار سيلي-مارين با استفاده از تكنيك HPLC نشان داد بالاترين مقدار آن در غلظت¬هاي 100 ميكرومولار متيل جاسمونات و 100 ميكرومولار ساليسيليك اسيد حاصل شد. اندازه گيري بيان ژن‌هاي PAL، CAD و CHI در مسير بيوسنتز اين تركيب داروئي نيز نشان داد كه بيشترين بيان در غلظت 100 ميكرومولار متيل جاسمونات توسط ژن¬هاي PAL و CAD در روز سوم و ژن CHI در شش ساعت اول بوده است. همچنين بيشترين بيان در غلظت 100 ميكرومولار ساليسيليك اسيد توسط ژن PAL در روز ششم، در ژن CAD شش ساعت اول و در ژن CHI روز سوم بوده است. در مجموع نتايج حاصل از اين پژوهش نشان داد كه مي¬توان از اليسيتورهاي متيل جاسمونات و ساليسيليك اسيد در كشت سوسپانسيون به¬منظور افزايش مقدار سيلي¬مارين در صنايع داروئي بهره برد.
چكيده انگليسي :
Milk thistle (silybum marianum) is a member of the Asteraceae family. This plant is known as one of the most important medicinal and oil plant in the world. The importance of this plant is due to the presence of a type of flavonolignan called silymarin, which is used as a medicine to treat stomach, intestinal and plague diseases, and also protects nerve cells, pancreas and kidneys with its antioxidant effects. The medicinal effects of this plant is used as a special treatment for liver diseases. Plant cell and tissue culture is a powerful tool for the production of secondary metabolites. In this research, an attempt was made to increase the amount of this secondary metabolite by elicitation of suspension culture with methyl jasmonate and salicylic acid. For this purpose, at first, callus was induced by using the leaf parts of this plant under treatment with different concentrations of kinetin, 2,4-D and picloram. The best calli in terms of number, fresh weight and area were obtained in the medium containing 0.8 mg/l of kinetin, 0.1 mg/l of 2,4-D and 2 mg/l of picloram. After optimizing the suspension culture with different concentrations of methyl jasmonate and salicylic acid elicitors, the growing cells were sampled in six hours, three and six days. Measuring the amount of silymarin using HPLC technique showed that the highest amount was obtained in the treatments by 100 μM methyl jasmonate and 100 μM salicylic acid. Measuring the expression of PAL, CAD and CHI genes in the biosynthesis pathway of this medicinal compound also showed that in the concentration of 100 μM methyl jasmonate, the highest expression of PAL and CAD genes was on the third day and CHI gene on the first six hours. Also, in the concentration of 100 μM salicylic acid, the highest expression of PAL, CAD and CHI genes was observed on the sixth day, six hours, and third day, respectively. In conclusion, the results of this research showed that methyl jasmonate and salicylic acid elicitors can be used in suspension culture in order to increase the amount of silymarin in the pharmaceutical industry.
