پديد آورنده :
يامچي، احمد
عنوان :
بيان فراوان ژن - پرولين -5-كربوكسيلات سنتاز)p5cs(، با هدف افزايش مقاومت به تنش هاي اسموتيك در گشاه تراز ريخت توتون )Nicotiana tabacum cv. Xanthi(
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
گرايش تحصيلي :
بيوتكنولوژي
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
[ب]، چهارده، 154، [II]ص .: مصور، جدول، عكس
استاد راهنما :
فردوس رستگارجزي، سيروس قبادي
استاد مشاور :
مير موسوي، علي اصغر كارخانه
توصيفگر ها :
صفرتنشي /تنش هاي زيستي ،محيطي ،اسمزي /ژن هاي سنتزكننده اسمولايت /پروتئين هاي شوك حرارتي /بيوسنتزپرولين /زيست پرتابي /اگروباكتريوم /تراريختي باليپوزوم ها /تقطيرفنل /هضم آنزيمي /واكنش ليگاسيون /روش ساتربلاتينگ /ژنوم گياهي /
استاد داور :
مسعود بهار، بدرالدين ابراهيم سيد طباطبائي
تاريخ ورود اطلاعات :
1396/08/08
چكيده فارسي :
تجمع ايمولايت ها در سلول گياهي يكي از مكانيزم هاي كليدي و همچنين يك پاسخ عمومي در برابر استرس هاي اسموتيكي مي باشد. در گياهان سنتز پرولين در شرايط عادي از مسير اورنيتين است ، ولي تحت شرايط يك مسير كمكي ديگري كه شامل تبديل اسيد -Lگلوتاميك به ( GSAگلوتاميل -rسمي آلدئيد) توسط آنزيم ( P5CSپرولين 5-كربوكسيلات سنتاز ) مي باشد. در سيتوپلاسم GSAبدون دخالت هيچ آنزيمي به -پرولين -5-كربوكسيلات تبديل مي گردد كه نهايتا اين ماده تحت تاثير آنزيم (P5CRپرولين 5-كربوكسيلات ردكتاز) به صورت -Lپرولين در مي آيد. در اين بررسي ، براي تراريخت گياه توتون Nicotiana tabacum cv. xanthiبه عنوان گياه مدل ، جهت بالا بردن افزايش بيان ژن P5csو بنابراين افزايش سطح توليد پرولين در گياه توتون تلاش شد. به اين منظور cDNAمربوط به ژن P5csگياه آرابيد و پسيس كه در وكتور اوليه pBluescriptكلون شده بود، مورد استفاده قرار گرفت . بطوريكه ژن P5csتحت تاثير آنزيم هاي برشي محدودگر Bam HI،Eco RV، Eco RIو XhoIاز وكتور اوليه جداسازي و در دو حالت مختلف با استفاده از پروموتور 53Sدر وكتور ثانويه pBI 121در محل T-DNAمربوط به وكتور، كلون گرديد: كلون به دست آمده به عنوان كلون Xكه حاوي ژن گزارشگر gusو كلون Nو Eكه فاقد ژن گزارشگر gusبودند، نامگذاري شدند. كلون Nبه دليل داشتن ترميناتور Nos، از كلون Eكه چنين ترميناتوري نداشت متمايز شد. سپس قسمت T- DNAحاوي ژن هدف از دستواره هاي طراحي شده با واسطه گري A. tumefaciensبه گياه توتون منتقل شدند. دستواره هاي تهيه شده و گياهان تراريخت به روش ملكولي PCR، هضم آنزيمي Dot blotting، ساترن بلاتينگ ، الكتروفورز دو بعدي و همچنين با روشهاي بيوشيميايي سنجش آنزيم GUSو سنجش پرولين تاييد شدند. بعد از مخلوط كردن قطعات برگ گياه توتون با اگروباكتريوم در محيط آب استريل ، كالوس زايي در محيط كشت انتخابي MSشامل آنتي بيوتيك هاي كانامايسين به ميزان 100-50ميلي گرم در ليتر وسفاتوكسيم به ميزان 500ميلي گرم در ليتر و همچنين هورمونهاي NAAبه اندازه 1/0ميلي گرم در ليتر و BAPبه اندازه 1ميلي گرم انجام گرفت . قطعات تراريخت شده قادر به ادامه رشد در محيط كانامايسين بودند و پس از توليد كالوس ، جنين ها و جوانه هاي حاصل از كالوس به محيط كشت انتخابي انتقال داده شدند. در ادامه با حذف هورمون هاي NAAو BAP، گياهچه هاي حاصل شروع به ريشه زايي كردند. بعد از اين مرحله گياهچه هاي ريشه دار، از محيط In Vitroبه گلدان منتقل شدند...
استاد راهنما :
فردوس رستگارجزي، سيروس قبادي
استاد مشاور :
مير موسوي، علي اصغر كارخانه
استاد داور :
مسعود بهار، بدرالدين ابراهيم سيد طباطبائي
