پديد آورنده :
زحمت كش، آزاده
عنوان :
رديابي ژن Filia و پروتئين آن در تخمدان و تخمك گاو
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
[دوازده]،91ص.: مصور،جدول،نمودار
يادداشت :
ص.ع.به فارسي و انگليسي
استاد راهنما :
سعيد انصاري مهياري، مرتضي دليري جوپاري
استاد مشاور :
عباس شيرازي، حميدرضا رحماني
توصيفگر ها :
ژن فيلياي گاو , بلاستوسيست , ايمونوفلورسنس
تاريخ نمايه سازي :
3/12/93
استاد داور :
عباس پاكدل، بدرالدين ابراهيم طباطبائي، كامران قائدي
كد ايرانداك :
ID717 دكتري
چكيده فارسي :
چكيده فيليا Filia يكي ز ژنها مادر ست كه بر نرخ بارور موثر ست و ختلال در عملكرد آن منجر به ختلالات توليد مثلي در حيو ن ماده ميشود پروتئين فيليا در موش باعث تفكيك مناسب كروموزومها در رويان ميشود و همچنين در يك مجموعه پروتئيني در ناحيه زير كورتكسي تخمك و رويان موش حضور د رد كه بر تكامل روياني موثر ست تاكنون بيان فيليا در موش نسان و گوسفند بررسي و گز رش شده ست ولي در گاو طلاعاتي در دسترس نيست در ين تحقيق بهكمك محيط كشت بهينهساز شده بر كشت آزمايشگاهي رويان گاو جهت تامين منابع ستخر ج RNA بيان ژن فيليا در سطح mRNA مورد بررسي قر ر گرفت بدين منظور تخمكها ز تخمد نها گاوها كشتارشده جمعآور شد و تعد د ز آنها بهصورت آزمايشگاهي بالغ شد ز ين تعد د بخشي و رد مرحله لقاح آزمايشگاهي شد و در نهايت در محيطها كشت يك و دومرحله بهينهساز شده با ۰۰۱ نانوگرم در ميكروليتر مكمل EGF تا مرحله بلاستوسيست كشت د ده شد ستخر ج RNA ز تخمد ن ويد كت شش قلب كبد و جنين ۰۴ ۰۳ روزهي گاو تخمك نابالغ تخمك بالغشده رويانها دو چهار و هشت تا ۶۱ سلولي و بلاستوسيست نجام شد نتها ۵ تو لي پيشبينيشده رونوشت فيليا در NCBI با تو لي مشابه آن در نسان بلاست گذ شته شد و طر حي آغازگر ز رو ناحيهي حفاظتشده آن بر تكثير يك قطعه با ۴۶۱ جفت باز صورت گرفت همچنين آغازگر ديگر بر تكثير ۳۴۴ جفت باز ز بخش د خليتري ز رونوشت فيليا طر حي شد و كنش PCR بهكمك آغازگرها طر حيشده بر فيليا و نيز ژن خانهد ر Histone H2a در بافتها تخمك و رويانها مر حل مختلف نجام شد و نتايج لكتروفورز ژلها بهصورت تصوير ثبت و قطعه موردنظر تعيين تو لي شد بر تعيين ند زه كل تو لي رونوشت فيليا بررسي بيو نفورماتيك رو تو لي فيليا و آزمايش 3 RACE PCR نجام شد جهت مقايسه كمي ميز ن بيان در مر حل مختلف تخمك و رويان آزمايش Real Time PCR صورت گرفت بر بررسي بيان پروتئين فيليا بتد تو لي تعيينشده رونوشت فيليا به پروتئين ترجمه شد و تعد د ۵۱ سيدآمينه ز نتها آميني آن سنتز و با KLH كانژوگه شد بر توليد آنتيباد عليه پروتئين فيليا پپتيد موردنظر در يك برنامه زماني دوماهه به خرگوش تزريق شد و خونگير پيش ز تزريق وليه و پس ز تزريق نهايي نجام شد سرم بهكمك آزمايشها د تبلات و لايز بر تعيين ختصاصيت تشخيص پروتئين فيليا مورد تاييد قر ر گرفت بر آزمايش يمونوفلورسنس بافتها تخمد ن ويد كت و رحم گاو و همچنين تخمد ن گوسفند به آزمايشگاه منتقل و پس ز فرآور بهضخامت پنج ميكرومتر برش د ده شد و رو سلايد قر ر گرفت آزمايش يمونوفلورسنس با غلظت ۰۰۳ ۱ آنتيباد وليه عليه فيليا نجام شد و نتايج بهكمك ميكروسكوپ فلورسنت مورد بررسي قر ر گرفت نتايج RT PCR نشان د د كه نسخههاي فيليا تنها در تخمد ن و مر حل مختلف تكاملي ز تخمك نابالغ تا رويان در مرحلهي بلاستوسيست وجود د رد و كنش 3 RACE PCR نشان د د كه تنها يك قطعه با ۰۰۶۱ جفت باز تكثير شد و هيچ قطعهي كوچكتري مشاهده نشد بررسي ژن فيليا و پروموتر فرضي آن نشان د د كه تنها يك جايگاه شروع رونويسي در نوكلئوتيد ۴۹ بالادست كدون آغاز قر ر د رد و ين ژن د ر ي سه گزون ست و حتمال ميرود كه mRNA فيلياي گاو تنها يك و ريانت د شته باشد ين نتايج ختلافات ميان نشخو ركنندگان و جوندگان ر نشان ميدهد بيان ژن فيليا در مرحلهي بلوغ نسبت به قبل بلوغ كاهش و در مر حل دو و چهارسلولي فز يش يافته ست ولي ين تغيير ت ز نظر آماري معنيد ر نبود بيان ژن در مرحلهي هشت تا ۶۱ سلولي بهطور معنيد ري فز يش و در مرحلهي بلاستوسيست با نسبت قابلتوجهي كاهش پيد كرد فز يش بيان در مرحلهي هشت تا ۶۱ سلولي بيان روياني فيليا و نياز بحر ني رويان ر به ين نسخه در تقسيم چهارم سلولي نشان ميدهد آزمايشها د تبلات و لايز ختصاصيت عملكرد آنتيباد توليدشده ر تاييد كرد بررسي يمونوفلورسنس رو بافت ها نشان د د پروتئين فيليا تنها در سيتوپلاسم تخمك فوليكولهاي تخمد ن گاو بيان ميشود و در گوسفند بيان آن به ناحيه ي زير كورتكسي تخمك محدود ميشود با توجه به ينكه پروتئين فيليا در موش باعث تفكيك مناسب كروموزومها در رويان ميشود و بر بارور موثر ست حتمال ميرود ين پروتئين نقش مشابهي نيز در نشخو ركنندگان د شته باشد و ژهها كليدي ژن فيليا گاو تخمك بلاستوسيست بيان روياني يمونوفلورسنس
چكيده انگليسي :
Tracking of Filia Gene and Related Protein in Bovine Ovary and Oocyte Azadeh Zahmatkesh a zahmatkesh@ag iut ac ir November 11 2014 Department of Animal Sciences Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 Iran Supervisor Saeid Ansari Mahyari s ansari@cc iut ac ir Supervisor Morteza Daliri Joupari daliri@nigeb ac ir Advisor Abolfazl Shirzai shiraziabbas@yahoo com Advisor Hamidreza Rahmani hrahmani@cc iut ac ir Department Graduate Program Coordinatore Mohammad Mehdi Majidi Abstract Filia is a maternal effect gene important for female reproduction In the present study bovine Filia expression was studied at mRNA and protein level Oocytes were matured and fertilized and embryos were cultured to blastocyst stage RNA were extracted from bovine ovary oviduct lung heart liver 30 to 40 day fetus immature oocytes matured oocytes 2 4 8 to 16 cell embryos and blastocysts Primers were designed to amplify 164 bp and 443 bp fragments Bioinformatic analysis and a 3 RACE PCR experiment were performed to analyze the whole Filia mRNA A Real Time PCR was performed to compare the mRNA level in different stages of in vitro development with immature oocytes Immunofluorescence analysis was performed on bovine ovary oviduct and uterus RT PCR results showed that Filia transcripts are only detected in ovary oocytes and different stages of embryo development By 3 RACE PCR only a 1600 bp fragment was amplified Bioinformatic analysis indicated one transcription start site and three exons for Filia gene Filia expression significantly increased at 8 to 16 cell stage which shows embryonic activation of Filia gene and it decreased at blastocyst Immunofluorescence showed Filia protein expression in bovine oocyte cytoplasm We suggest an important role for Filia in bovine reproduction Keywords Bovine Filia gene Oocyte Blastocyst RACE PCR Embryonic activation Immunofluorescence Department of Animal Sciences College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan Iran Department of Animal and Marine Biotechnology National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology Tehran Iran Reproductive Biotechnology Research Center Avicenna Research Institute ACECR Tehran Iran
استاد راهنما :
سعيد انصاري مهياري، مرتضي دليري جوپاري
استاد مشاور :
عباس شيرازي، حميدرضا رحماني
استاد داور :
عباس پاكدل، بدرالدين ابراهيم طباطبائي، كامران قائدي
