پديد آورنده :
بنكدار، الهام
عنوان :
اثر انجماد شيشه اي رويان موش بر تغييرات هيستوني و بيان ژن آنزيم هاي تغيير دهنده ي هيستوني
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
سيزده،105ص.: مصور،جدول،نمودار
يادداشت :
ص.ع.به فارسي و انگليسي
استاد راهنما :
محمدعلي ادريس، محمدحسين نصراصفهاني
استاد مشاور :
حميدرضا رحماني
توصيفگر ها :
تغييرات اپي ژنتيكي هيستوني , تحريك تخمك ريزي , بيان ژن , بلاستوسيست , جفت و جنين 5/9 روزه
تاريخ نمايه سازي :
94/2/6
استاد داور :
عباس پاكدل، ابوالقاسم اسماعيلي، كامران قائدي
كد ايرانداك :
ID741 دكتري
چكيده فارسي :
چكيده در عالم طبيعت هنگامي كه لقاح صورت ميگيرد گامت نر و گامت ماده طي دو فرآيند شكلگيري مجدد هستهاي و برنامهريزي مجدد هستهاي به تمايز نيافته و همهتوان بر ميگردند طي فرآيند وضعيت كاملا برنامهريزي مجدد هستهاي تغييرات پيچيده اپيژنتيكي در ژنوم رويان چه در سطح DNA و چه در سطح هيستونها رخ ميدهد كه اثر بسيار مهمي بر روي تكوين يك موجود دارد از آنجاييكه در پستانداران عوامل محيطي طي اوايل تكوين نقش تعيين كنندهاي را در تنظيم اپيژنتيكي بر عهده دارند از اينرو در اين رساله به بررسي اثر روشهاي كمك توليد مثلي بر ميزان زندهماني و توانايي نمو و همچنين ارزيابي چند نشانگر اپيژنتيكي هيستوني در مرحلهي پيش از لانهگزيني و بيان ژن آنزيمهاي درگير در اين تغييرات و نيز بيان ژن نشانگرهاي پرتوان 2 Pou5f1 Sox و Nanog در دو مرحلهي پيش از لانهگزيني و پس از آن پرداخته شد همچنين به منظور بررسي اثر روشهاي كمك توليدمثلي بر روي ميزان توانايي نمو جنين ميزان جايگاه جذب و جايگاه لانهگزيني و همچنين وزن جفت و جنين در روز 5 9 جنيني مورد بررسي قرار گرفت در مرحلهي پيش از لانهگزيني چهار گروه تيماري شامل گروههاي C كنترل S تحريك تخمكريزي SI تحريك تخمكريزي كشت در شرايط برونتني و SVI تحريك تخمكريزي انجماد شيشهاي كشت در شرايط برونتني مورد بررسي قرار گرفتند نتايج نشان داد كه ميزان تشكيل بلاستوسيست و شكوفايي بلاستوسيست در گروه SVI بهميزان معنيداري پائينتر از گروه SI مي باشد 50 0 P آناليز نيمه كمي نشانگرهاي اپيژنتيكي در تروفكتودرم نشان داد كه گروه C پائينترين شدت نور فلورسنت هسته اي را براي اين سه نشانگر دارا ميباشد و اين تفاوت تنها براي استيله شدن 9 H3K معنيدار بود 50 0 P براي استيله شدن 21 H4K ميزان شدت نور فلورسنت در گروه SVI بهميزان معنيداري بالاتر از گروههاي S و C بود كه اين تفاوت را ميتوان به تنش حاصل شده از مواد محافظ انجمادي و سرماي وارد شده به اين سلولها نسبت داد بررسي اين نشانگرها در تودهي دروني سلولي نشان داد كه گروه S براي استيله شدن 9 H3K نسبت به گروههاي C و SI و براي تري متيله شدن 4 H3K نسبت به گروه SI و SVI بهميزان معنيداري بالاتر بود 50 0 P اين نتيجه را ميتوان اين گونه توضيح داد كه تخمكهاي بهدست آمده از موشهاي تحريك تخمكريزي شده ممكن است به اندازه تخمكهاي حاصله از موشهايي كه سيكل طبيعي داشتند توانا نباشند برپايه اين فرض انتظار ميرود كه بلاستوسيستهاي بهدست آمده از گروههاي SI و SVI ميزان بالايي از استيله شدن 9 H3K و تري متيله شدن 4 H3K را داشته باشند اما در عمل چنين نبود اين تفاوتها ميتواند به اين دليل باشد كه تخمك هاي نامناسب بهدست آمده از تحريك تخمكريزي ممكن است در گروههاي SI و SVI تحت كشت در شرايط برونتني و انجماد شيشهاي به مرحله بلاستوسيست نرسيده باشند و در نتيجه بلاستوسيستهايي كه از تخمك هاي با شايستگي بالا حاصل شدهاند در اين گروهها مورد ارزيابي قرار گرفتهاند بنابراين ميزان اين تغييرات اپيژنتيكي در دو گروه SI و SVI شبيه به گروه C است بررسي نتايج حاصل از بيان ژنها در اين مطالعه نشان داد كه دستكاريهاي موجود در روشهاي كمك توليد مثلي القا كنندهي الگوي بياني غير طبيعي ژنها در اين مرحله ميباشند از آنجاييكه در تمام ژنهاي بررسي شده در رويان در مرحلهي بلاستوسيست تفاوت معنيداري در ميزان بيان ژن بين گروههاي تيماري SI و SVI ديده نشد ميتوان گفت كه انجماد شيشهاي رويان دو سلولي موش اثرخاصي بر ميزان بيان ژن آنزيمهاي درگير در تغييرات اپيژنتيكي و همچنين بيان ژن نشانگرهاي پرتوان بررسي شده در مرحلهي پيش از لانهگزيني در مقايسه با كشت در شرايط برونتني ندارد بهمنظور بررسيهاي پس از لانهگزيني علاوه بر داشتن دو گروه C و S گروههاي SIT ST CT و SVIT هم كه در آنها عمل انتقال رويان علاوه بر دستكاريهاي ديگر صورت گرفته بود مورد آناليز قرار گرفتند نتايج نشان داد كه با افزايش دستكاريها درصد جايگاه جذب افزايش و وزن جنين كاهش مي يابد كاهش وزن جنين در گروه تيماري S كه تنها تيمار تحريك تخمك ريزي بر روي آنها صورت گرفته بود نسبت به گروه C معنيدار بود 50 0 P دادههاي بهدست آمده از بيان ژنها در جنين 5 9 روزه نشان داد كه ميزان بيان بيشتر ژنها در گروه تيماري S با گروه هاي ديگر متفاوت است دليل اين تفاوت را ميتوان اينگونه توضيح داد كه تحريك تخمكريزي باعث آزادسازي تخمكهاي غيرطبيعي گردد
چكيده انگليسي :
Effect of Mouse Embryo Vitrification on Histone Modifications and Expression of Histone Modifier Enzymes Elham Bonakdar e bonakdar@ag iut ac ir February 15 2015 Department of Animal Sciences College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 IranMohammad Ali Edriss edriss@cc iut ac irMohammad Hossein Nasr Esfahani mh nasr esfahani@royaninstitute orgHamid Reza Rahmani Department Graduate Program Coordinator M M MajidiAbstractEpigenetic biomarkers in preimplantation embryos are critical for appropriate embryonicdevelopment While ARTs are considered to be safe some studies suggest that ARTsmanipulations may perturb the epigenetic information and subsequently the health of theoffspring The aim of this study was to evaluate the effects of superovulation vitrification invitro culture and embryo transfer on a panel of epigenetic biomarkers in blastocysts andexpression of enzymes involved in histone modifications and pluripotency markers genes inblastocysts and E9 5 Results showed that vitrification decreased the developmental competenceof embryos cultured in vitro P 0 05 Semi quantitative analysis revealed that vitrificationsignificantly affects the fluorescence intensity of H4K12 acetylation in trophectoderm TE incomparison to C group P 0 05 Superovulation in S group significantly elevated the level ofH3K9 acetylation and H3K4 tri methylation in ICM P 0 05 ART manipulations influence theH3K9 acetylation P 0 05 but not H3K4 tri methylation in TE P 0 05 Assisted reproductivetechniques influenced most genes expression 5 of 7 genes in the blastocysts P 0 05 In nextstep this perturbed mRNA expression restrict to E9 5 superovulated fetuses and placentae It islikely that hormonal stimulation in the superovulated mice alters the environment of the uterus which adversely affects the normal epigenetic patterns of the resultantKey Wordshistone epigenetic modifications superovulation vitrification gene expression blastocyst E9 5concepti Department of Animal Sciences College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 Iran Department of Reproductive Biotechnology at Reproductive Biomedicine Research Center Royan Institute forBiotechnology ACECR Isfahan Iran
استاد راهنما :
محمدعلي ادريس، محمدحسين نصراصفهاني
استاد مشاور :
حميدرضا رحماني
استاد داور :
عباس پاكدل، ابوالقاسم اسماعيلي، كامران قائدي
