تشخيص آلودگي هاي مخلوط فايتوپلاسمايي در درختان بادام با استفاده از روش هاي مبتني بر PCR

چكيده فارسي :

چكيده جاروي جادوگر بادام با عاليم جارويي شدن ريز برگي و زرد ي عمومي يك بيماري مخرب در درختان بادام است كه در استان هاي اصفهان و چهار محال و بختياري انتشار وسيعي دارد اگرچه فايتوپالسماي Candidatus Phytoplasma phoenicium به عنوان عامل اصلي بيمار ي جارو ي جادوگر بادام در لبنان و ايران معرفي شده است ولي به نظر مي رسد كه دو فايتوپالسماي Ca P phoenicium و Ca P aurantifolia در منطقه مركزي ايران از اهميت بيشتري برخوردار باشند با وجودي كه هر يك از اين گونههاي فايتوپالسمايي قادر به ايجاد خسار ت بر رو ي ميزبان خود هستند همراهي چند فايتوپالسماي مختلف در تشديد عاليم و خسار ت بيماري نيز محتمل است به منظور بررسي آلودگي مخلوط فايتوپالسمايي در درختان بادام طي بازديد از باغا ت بادامكاري استانهاي اصفهان نجف آباد همت آباد تيران و حاجي آباد و چهارمحالوبختياري شهركرد سامان اماميه چمچنگ هوره ايل بيگي شورابصغير و محمودآباد 336 نمونه برگي از درختان مشكوك به بيماريهاي فايتوپالسمايي با عاليم جارويي شدن ريز برگي زردي پيچيدگي برگها خشكيدگي تجمع برگي در انتهاي شاخهها و قهوه اي شدن محل آوند تهيه شد پس از استخراج DNA از رگبرگهاي گياهان جمع آوري شده براي رديابي عوامل فايتوپالسمايي در نمونه ها از واكنش PCR استفاده گرديد واكنش دور اول PCR با استفاده از جفت آغازگر7 P1 P و P1A P7A و واكنش Nested PCR با استفاده از جفت آغازگر 2 R16F2n R انجام شد كه در 11 نمونه قطعه 1236 جفت باز مورد انتظار تكثير يافت به منظور بررسي امكان وجود تنوع گونه اي در فايتوپالسماهاي رديابي شده مورد مطالعه آزمون PCR RFLP به كمك آنزيم هاي برشي RsaI HpaII HincII TaqI و HinfI انجام گرديد با توجه به نتايج توالي يابي حضور دو فايتوپالسماي Ca P aurantifolia و Ca P phoenicium در نمونه ها ي مورد بررسي ثابت شد برا ي رديابي آلودگي همزمان عوامل فايتوپالسمايي در بين نمونه ها آغازگرهاي اختصاصي از توالي هاي هاي شناخته شده دو گونه مزبور فايتوپالسمايي براساس نواحي ژني 16 23S rRNA طراحي شد طي واكنش PCR با نمونه هاي شاهد مثبت و منفي در بين جفت آغازگرهاي طراحي شده چهار تركيب 1 6651 AurF1 AurR جفت باز 2 6615 AurF1 AurR جفت باز 3 6315 AurF1 AurR جفت باز و 112 Aur AlmF Aur AlmR جفت باز براي تكثير جداگانه گروه Ca P aurantifolia و چهار تركيب 1 116 Pho F1 R جفت باز 1 113 Pho F2 R جفت باز 2 6261 Pho F1 R جفت باز و 2 121 Pho F2 R جفت باز براي تكثير Ca P phoenicium مناسب بودند جهت رديابي فايتوپالسماي Ca P solani در نمونههاي جمع آوري شده بادام منطقه از جفت آغازگر اختصاصي Stol12F R طراحي شده توسط سيد لوح موسو ي دانشجو ي كارشناسي ارشد بيماريهاي گياهي دانشگاه صنعتي اصفهان استفاده گرديد براي رديابي توام سه گونه فايتوپالسمايي مزبور از تركيب جفت آغازگر ي 2 PhoF2 R2 AurF1 R و Stol12F R در واكنش M ultiplex PCR استفاده شد با استفاده از اين روش در بين 11 نمونه كه آلودگي فايتوپالسمايي آنها با جفت آغازگر 2 R16F2n R اثبا ت شده بود سه نمونه به طور همزمان آلوده به سه فايتوپالسماي Ca P Ca P aurantifolia phoenicium و Ca P solani بودند 66 نمونه آلودگي توامان با Ca P aurantifolia و Ca P phoenicium نشان دادند و در 43 نمونه نيز دو فايتوپالسماي Ca P aurantifolia و Ca P solani حضور داشتند هيچكدام از نمونهها فايتوپالسماهاي Ca P phoenicium و Ca P solani را به طور همزمان نداشتند و يا به طور مستقل به Ca P solani آلوده نبودند با توجه به نتايج بدست آمده Ca P aurantifolia و Ca P phoenicium دو فايتوپالسماي اصلي همراه با درختان بادام مبتال به عاليم جاروي جادوگر و زردي تشخيص داده شدند به نظر مي رسد كه Ca P solani عامل اصلي ايجاد جاروي جادوگر يا زردي درختان بادام نيست و احتماال به صور ت آلودگي همراه با ساير فايتوپالسماها در تشديد عاليم نقشي ايفا مي كند با توجه به انتشار هر سه گونه فايتوپالسمايي در درختان بادام مبتال به جارو ي جادوگر ريزبرگي و زردي در استانهاي اصفهان و چهارمحالوبختياري مي توان فرض نمود كه رابطه دقيقي بين گونه فايتوپالسمايي منطقه جغرافيايي و نوع عاليم بيماري در بادام برقرار نيست در اين پژوهش تكنيك LAM P جهت رديابي سريع Ca P aurantifolia و Ca P phoenicium در جدايههاي مشكوك به بيماري جاروي جادوگر بادام بهكار رفت كه نتايج نشان داد كه اين روش براي شناسايي اين فايتوپالسما ها در نمونه هاي بادام قابل اعتماد است كلمات كليدي جاروي جادوگر بادام فايتوپالسماهاي بادام طراحي آغازگر آلودگي مخلوط

توكلي، فرناز

تشخيص آلودگي هاي مخلوط فايتوپلاسمايي در درختان بادام با استفاده از روش هاي مبتني بر PCR

جاروي جادوگر بادام , طراحي آغازگر