پديد آورنده :
سلطاني، ليلا
عنوان :
اثرهاي azacytidine,Reversine,Chir99021- وهمكشتي غيرمستقيم سلولهاي فيبروبلاست قلبي بر تكثير و تمايز سلولهاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان جنين گوسفند بسمت سلولهاي ماهيچه قلبي
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
شانزده، 185ص.: مصور
استاد راهنما :
حميدرضا رحماني، مرتضي دليري جوپاري
استاد مشاور :
اميرحسين مهدوي، مهدي شمس آرا
توصيفگر ها :
ارتعاشات , نويز
استاد داور :
رسول كوثر، مجيد طالبي، ابوالقاسم اسماعيلي
تاريخ ورود اطلاعات :
1395/07/05
كد ايرانداك :
ID909 دكتري
چكيده فارسي :
1 چكيده طب ترميمي بهمنظور سلول درماني نياز به تعداد فراواني سلول زنده دارد براي اين منظور مغز استخوان استحصال شده ميزان كمي سلول بنيادي مزانشيمي دارد استفاده از كوچك مولكولهاي محرك مسيرهاي تكثير ميتواند راهكار مناسبي براي افزايش تعداد اين سلولها باشد عالوهبراين توان تمايزي و پتانسيل بنيادي بودن اين سلولها در پاساژهاي متفاوت يكسان نميباشد و با افزايش سن كاهش پيدا ميكند كوچكمولكولها ميتوانند براي تمايززدايي استفاده شوند بدون آنكه خطرات رد پيوند و تشكيل تومور داشته باشند بر اين اساس هدف از اين مطالعه 1 ارزيابي تكثير سلولهاي بنيادي مزانشيمي مشتق از مغز استخوان جنين گوسفند با افزودن غلظتهاي مختلف 12099 chir 7 بررسي پيش تيمار سلولهاي بنيادي مزانشيمي با غلظتهاي مختلف reversine و سپس تيمار با 5 azacytidine بر تمايز به قلب سلولهاي بنيادي مزانشيمي و 3 بررسي غلظت مناسب 5 azacytidine reversine و همكشتي غيرمستقيم سلولهاي فيبروبالست قلبي بر تمايز به سلولهاي ماهيچهي قلبي در شرايط آزمايشگاهي بود سلولهاي بنيادي مزانشيمي از مغز استخوان جنين گوسفند جداسازي و در محيط 21 DMEM F كشت داده شدند آنتيژنهاي سطحي سلولهاي جداسازي شده با استفاده از فلوسايتومتري آناليز شدند عالوه براين سلولهاي پاساژ سوم بهمنظور اطمينان از بنيادي بودن آنها به سلولهاي استخواني و چربي تمايز داده شدند در آزمايش اول سلولهاي بنيادي مزانشيمي مشتق از مغز استخوان جنين گوسفند با غلظتهاي متفاوت 4 9 4 1 9 1 3 9 ميكروموالر 12099 chir كشت داده شدند در طول دورهي كشت تيمار با دوزهاي متفاوت 12099 chir تعداد كلوني دو برابر شدن جمعيت سلولي و زمان دو برابر شدن زندهماني سلولي مورد بررسي قرار گرفت عالوهبراين بيان ژن بتا كاتنين نيز ارزيابي شد كشت بدون 12099 chir بهعنوان گروه شاهد در نظر گرفته شد در آزمايش دوم پس از انجام آزمون سميت سلولي MTT غلظتهاي مختلف 5 azacytdine و reversine سلولهاي بنيادي مزانشيمي با غلظتهاي مختلف 544 644 344 reversine و 4471 نانوموالر براي مدت 80 ساعت و سپس حذف اين ريزمولكول و افزودن 5 azacytidine براي مدت 80 ساعت به محيط كشت سلولهاي بنيادي مزانشيمي در راستاي تمايز به قلب و سپس كشت بدون هيچگونه ريزمولكولي براي مدت 87 روز انجام گرفت در آزمايش سوم سلولهاي بنيادي مزانشيمي پاساژ سوم در گروههاي تيماري زير مورد استفاده قرار گرفتند تيمار 1 سلولهاي بنيادي مزانشيمي براي مدت 87 روز كشت شدند تيمار 7 سلولهاي فيبروبالست قلب جنيني بر روي چاهك الحاقي چمبر كشت شدند كه در ريز آن سلولهاي بنيادي مزانشيمي كشتشده بود گروه چمبر تيمار 3 گروه چمبر كه براي مدت 80 ساعت با 41 ميكروموالر 5 azacytdine پيش تيمار شده بود تيمار 0 گروه چمبر كه براي مدت 80 ساعت با 446 نانوموالر reversine و سپس 80 ساعت با 5 azacytidine كشتشده بود و درنهايت براي مدت 87 روز در محيط بدون هيچ مكملي كشت شدند بيان ژنهاي قلبي MYH6 Connexin43 ANP و Troponin I و ژنهاي سيگنالينگ 1 MAPK1 FGFr و 2 Smad بهوسيلهي Real time RT PCR و بيان پروتئينهاي قلبي آلفا اكتينين و Troponin I بهوسيلهي ايمونوسيتوشيمي و فلوسايتومتري مورد بررسي قرار گرفتند در اين مطالعه سلولهاي بنيادي مزانشيمي نشانگرهاي 44 CD166 CD را بيان كردند عالوهبراين بيان 43 CD و 54 CD ضعيف بود آناليز اويل رد و آليزارين رد نشان داد كه سلولهاي جداسازي شده به سلولهاي چربي و استخوان تمايز پيدا كردند در آزمايش اول يافتههاي ما نشان داد كه افزودن غلظتهاي 9 4 و 1 ميكروموالر 12099 chir به محيط كشت در مقايسه با غلظتهاي 9 ميكروموالر 12099 chir و گروه شاهد بهصورت معنيداري تكثير را افزايش داده بودند 94 4 p عالوهبراين پنج روز بعد از تيمار با اين كوچك مولكول نتايج نشان داده تيمارهاي 9 4 و 1 باعث افزايش تعداد كلوني در مقايسه با تيمارهاي كنترل و 9 ميكروموالر 12099 chir ميشود غلطت 1 ميكروموالر 12099 chir سبب تشكيل جمعيت سلولي بيشتر و زمان دوبرابر شدن كمتري در مقايسه با ساير غلظتها شده بود بيان بتا كاتنين در گروه مكمل شده با 1 ميكروموالر در مقايسه با گروههاي دريافتكنندهي غلظتهاي 9 4 و 9 1 بهصورت معنيداري باالتر بود 94 4 p بيان ژن Nanog در گروهي كه 446 نانوموالر reversine را دريافت كرده بود به صورت معني داري افزايش يافته بود در آزمايش دوم وجود غلظتهاي 443 و 446 نانوموالر reversine در مقايسه با ساير گروههاي تيماري سبب افزايش ميزان انعطافپذيري سلولهاي بنيادي و تمايز آنها به سمت سلولهاي ماهيچهي قلبي شده است در آزمايش سوم بيان ANP 6 MYH و تروپونين I در گروه چمبر كه هر دو كوچك مولكول را دريافت كرده بود به ميزان معنيداري در مقايسه با ساير گروههاي تيماري افزايش يافته بود در آزمايش سوم بيان ژنهاي مسير FGF
چكيده انگليسي :
158Effects of Chir99021 Reversine 5 azacytidine and Indirect Co culture of Cardiac Fibroblasts on In vitro Proliferation and CardiacDifferentiation of Ovine Fetal Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Leila Soltani Leilasoltani7@yahoo com July 17 2016 Department of Animal ScienceIsfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 Iran1st Supervisor Hamidreza Rahmani hrahmani@cc iut ac ir2nd Supervisor Morteza Daliri Joupari daliri@nigeb ac ir1st Advisor Amir Hossein Mahdavi 2nd Advisor Mehdi Shamsara College Graduate Program Coordinator Mohammad Mahdi Majidi1 Department of Animal Science College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan84156 83111 Iran Department of Animal Biotechnology National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology NIGEB Tehran 1497716316 IranAbstractThe aim of the present study was to evaluate three small molecules and indirect co cultures on expansion and cardiac differentiation of ovine bone marrow mesenchymalstem cells BM MSCs In the first experiment different concentrations of chir99021were evaluated on colony formation doubling number of population doubling time andthe number of viable BM MSCs In the second experiment for cardiac differentiation the BM MSCs were pretreated with different concentrations of reversine and then addedwith different concentrations of 5 azacytidine In the third experiment BM MSCs werecultured with the small molecules followed by indirect co culture with cardiacfibroblast In the second and third experiment expression of cardiac genes and proteinswere evaluated In the first experiment addition of 0 5 and 1 M of chir99021 tomedium significantly improved overall proliferation and colony formation compared tothe other groups In the second experiment the presence of 300 and 600nM of reversinecould increase the plasticity of BM MSCs and cardiac differentiation of these cells incomparison with other treatments In the third experiment addition of reversine and 5 azacytidine in indirect co culture increased expression of cardiac genes and proteins These results indicated that addition of reversine and 5 azacytidine into culture mediumcould be effective on ovine MSCs differentiation into cardiomyocytes Keywords Chir99021 proliferation 5 azacytidine reversine ovine mesenchymal stemcells indirect co culture cardiomyocytes differentiation 1 Introduction MSCs are a subset of non hematopoietic stem cells that originate from themeseoderm MSCs possess multilineage differentiation and self renewal ability MSCscan differentiate into many different type of cells such as osteoblast adipocytes andchondrocytes Cell therapy needs huge number of stem cell MSCs have a very lowfrequency in bone marrow samples The routine culture technique for expanding MSCs
استاد راهنما :
حميدرضا رحماني، مرتضي دليري جوپاري
استاد مشاور :
اميرحسين مهدوي، مهدي شمس آرا
استاد داور :
رسول كوثر، مجيد طالبي، ابوالقاسم اسماعيلي
