پديد آورنده :
فروغي، سعيد
عنوان :
رديابي و شناسايي درون همزيست هاي زنجرك Toya propinqua و تاثير آن ها بر انتقال ويروس رگه سبز رد مرغ
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
گرايش تحصيلي :
گياهپزشكي (بيماري شناسي گياهي)
محل تحصيل :
اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان
صفحه شمار :
هشت، 191ص. : مصور، جدول، نمودار
توصيفگر ها :
Toya propinqua , همزيست , ويروس رگه سبزرد مرغ , راندمان انتقال , YLS , Spiroplasma , Paenibcillus , Acinetobacter، , Wolbachia
استاد داور :
بهرام شريف نبي، رحيم مهرابي
تاريخ ورود اطلاعات :
1399/08/07
رشته تحصيلي :
مهندسي كشاورزي
تاريخ ويرايش اطلاعات :
1399/10/06
چكيده فارسي :
چكيده برهمكنشهاي بين ميزبان و ميكروارگانيسمهاي همراه ميتواند بر روي ميزبان تأثير داشته باشد يكي از تحقيقات نوظهـور در اين مورد بررسي تأثير باكتريهاي همزيست در ناقلين حشرهاي و انتقال ويروسهاي گياهي توسط آنهاست مطالعات اخير نشان دادهاند كه همزيستها ميتوانند تا حد زيادي در انتقال ويروسهاي حشره برد تأثير داشته باشند بـه ايـن منظـور زنجرك Toya propinqua از علفهاي هرز گرامينه اطراف مزارع بويژه گياه مرغ در مناطق اصفهان مباركه زرينشهر و گلپايگان جمعآوري شد پس از بررسي مقدماتي خصوصيات مورفولوژيكي زنجركهاي جمعآوري شده جهت تكثير بر روي گياه مرغ در داخل قفسههاي آلومينيومي رهاسازي شدند براساس خصوصيات مورفولوژيك بدن جنيتالياي حشره نر و توالي يابي ژن سيتوكروم اكسيداز زنجـركهـاي جمـعآوري شـده Toya propinqua تشـخيص داده شـدند بـه منظـور شناسايي همزيستهاي باكتريايي قابل كشت زنجـرك Toya propinqua سوسپانسـيون بـدن آنهـا بـر روي محـيط NA كشت داده شد پس از خالصسـازي كلنـيهـاي رشـدكرده اسـتخراج DNA از آنهـا انجـام شـد و PCR بـا اسـتفاده از آغازگرهاي 27F 1492R صورت گرفت توالييابي باندهاي تكثيرشده و جستجوي بلاست منتج به شناسايي دو باكتري sp Paenibacillus و Acinetobacter sp شد جهت شناسايي پروكاريوتهاي همزيست غيرقابل كشـت پـس از اسـتخراج PCR DNA با استفاده از آغازگرهـاي اختصاصـي Cardinium sp CLOF CLOR1 81F 691R Wolbachia sp Rickettsia sp RBF RBR و 3 Spiroplasma sp Spi f1 Spi r انجـام شـد بـا تـوالييـابي بانـدهـاي تكثيـر شـده و جسـتجوي بلاسـت پروكـاريوتهـاي Rickettsia sp Cardinium sp Wolbachia sp و Spiroplasma sp شناسـايي شدند بر اساس اطلاعات ما به جز Wolbachia sp ساير همزيستها براي اولين بار از T propinqua گزارش ميشوند با هدف بررسي حضور همزيستهاي مخمرمانند YLS در T propinqua با استفاده از DNA استخراج شده از حشره اقدام به انجام PCR با آغازگرهاي 4 ITS5 ITS شد توالييابي باند تكثير شده و جستجوي بلاست نشاندهندهي وجود اين نـوع از همزيسـتهـا در T propinqua بـود بـه منظـور تعيـين فراوانـي همزيسـتهـاي Cardinium sp Wolbachia sp و Rickettsia sp در جمعيتهاي T propinqua از شهرهاي اصفهان گلپايگان زرينشهر و مباركـه اقـدام بـه جمـعآوري زنجـرك گرديـد و بـا اسـتفاده از آغازگرهـاي اختصاصـي رديـابي همزيسـتهـا انجـام شـد در كـل Wolbachia sp ـ ـ ـ ـ ـ Cardinium sp و Rickettsia sp در از زنجركهاي مورد مطالعـه يافـت شـدند حـدود از نرهـا و از مادهها داراي همزيست بودنـد فراوانـي Cardinium sp Wolbachia sp و Rickettsia sp بـرآورد شـد آلـودگي منفـرد Wolbachia sp در Cardinium sp Wolbachia sp در و sp Wolbachia sp Rickettsia در و هر سه همزيست در از زنجركها محاسبه شد همچنين بررسي حضور Wolbachia sp و sp Rickettsia در كلنيهاي آزمايشگاهي پس از حـدود دو سـال اسـتقرار در اتـاق حـرارت ثابـت در زنجـرك صـورت گرفت درمجموع حضور Wolbachia sp در كلنيهاي آزمايشگاهي حـدود و Rickettsia sp حـدود برآورد گرديد آلودگي همزمان اين دو همزيست محاسبه شد و از زنجـركهـا فاقـد ايـن دو همزيسـت بودنـد انتق ـال وي ـروس رگ ـه س ـبزرد م ـرغ cynodon chlorotic streak virus CCSV در ش ـرايط آزمايش ـگاهي توس ـط T ـ ـ ـ ـ ــ ـ ـ propinqua انجام و راندمان آن بررسي شد نتايج نشان داد درصد از پوره ها و بالغين قادر به انتقال ويروس از مـرغ آلوده به يولاف بودند به منظور تعيين تأثير درون همزيستهاي Wolbachia sp و Rickettsia sp بر انتقال ويـروس رگـه سبزرد مرغ توسط T propinqua زنجركها در آزمون انتقال بررسي شدند ابتدا زنجركها به مدت سه روز بر روي مرغ آلوده قرار گرفتند و سپس بر روي مرغ سالم به مدت يك ماه نگهداري شـدند پـس از طـي دوره كمـون زنجـرك هـا بـه صورت تكي بر روي گياه يولاف در مرحله كلئوپتيل قرار داده شدند زنجرك ها پس از سه روز به فريزر C منتقـل شـــدند از بـــرگ گياهـــان يـــك مـــاه پـــس از انتقـــال RNA كـــل اســـتخراج و در RT PCR بـــا آغـــازگرهـــاي اختصاصي CCSVIrF CCSVIrR بررسي شدند از زنجركها نيز DNA استخراج و همزيستهاي Wolbachia sp و sp Rickettsia در آنها توسط PCR با آغازگرهاي اختصاصي رديابي شدند تجزيه و تحليل دادههـاي حاصـل بـا اسـتفاده از آزمون t نشاندهنده تـأثير Wolbachia sp و Rickettsia sp بـه ترتيـب در كـاهش وافـزايش رانـدمان انتقـال CCSV در جمعيت مورد بررسي از T propinqua بود تمركز پژوهش هاي آينده بر روي برهمكنش هاي چهار گانه گياه ويروس ناقل همزيست باعث افزايش بينش ما در اين زمينه مي گردد كلمـــات كليـــدي Toya propinqua همزيســـت Cardinium Wolbachia Acinetobacter Paenibacillus YLS Spiroplasma Rickettsia ويروس
چكيده انگليسي :
Detection and identification of endosymbionts of Toya propinqua and their effects on transmission of cynodon chlorotic streak virus Saeed Foroughi saeed foroughi1372@gmail com September 20 2020 Department of Plant Protection Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 IranDegree M Sc Language FarsiSupervisor Amir Massah amassah@cc iut ac irAbstractThe interactions between the host and associated microorganisms could affect the host One ofthe emerging studies in this field is the effects of symbiotic bacteria on insect vectors and thetransmission of plant viruses Recent studies have revealed that symbionts can significantlyaffect the transmission of insect borne viruses For this purpose Toya propinqua was collectedfrom weed around the fields mostly bermudagrass in Isfahan Mobarakeh Zarrinshahr andGolpayegan After a preliminary study of morphological characteristics the collectedplanthoppers were released into the aluminum boxes containing bermudagrass for propagation Morphological characteristics of the body the male genitalia and the cytochrome oxidase genesequence confirmed the collected planthoppers as Toya propinqua To identify culturablebacterial symbionts of Toya propinqua the body suspension of planthoppers was cultured onNA medium The colonies were subcultured and DNA was extracted from purified colonies PCR was performed using 27F 1492R primer pair Sequencing of amplified bands and BLASTsearch led to identifying two bacteria Paenibacillus sp and Acinetobacter sp In order toidentify non culturable prokaryotic symbionts extracted DNA of planthoppers was subjected toPCR using specific primers of Wolbachia sp 81F 691R Cardinium sp CLOF CLOR1 Rickettsia sp RBF RBR and Spiroplasma sp Spi f1 Spi r3 Sequencingthe amplified segments and BLAST search revealed the associationof Wolbachia sp Cardinium sp Rickettsia sp Cardiobacter sp and Spiroplasma sp with T propinqua According to our information excepting Wolbachia other symbionts are reportedfrom T propinqua for the first time In order to detect yeast like symbionts YLS PCR wasperformed using ITS5 ITS4 primer pair Sequencing the amplicon and BLAST search showedthe presence of YLS in T propinqua For determining the frequency of Wolbachia Cardinium and Rickettsia symbionts in T propinqua populations planthoppers were collected fromIsfahan Golpayegan Zarrinshahr and Mobarakeh and were tested by PCR Intotal Wolbachia sp Cardinium sp and Rickettsia sp were found in 75 of the planthoppers About 94 4 of males and 59 1 of females showed to have symbionts The frequencyof Wolbachia sp was 72 5 Cardinium sp 45 and Rickettsia sp 42 5 Single infectionof Wolbachia sp was calculated in 15 Wolbachia sp Cardinium sp in 17
استاد داور :
بهرام شريف نبي، رحيم مهرابي
