پديد آورنده :
مظفري، الهام
عنوان :
بررسي حضور واكسن ويروس نكروز عفوني مراكز خونساز (IHNV) در بافتهاي مختلف ماهي قزلآلاي رنگينكمان (Oncorhynchus mykiss)
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
گرايش تحصيلي :
علوم و مهندسي شيلات (بوم شناسي آبزيان)
محل تحصيل :
اصفهان : دانشگاه صنعتي اصفهان
صفحه شمار :
دوازده، 73ص.: مصور (رنگي)، جدول، نمودار
استاد راهنما :
امير حسين جلالي، عيسي ابراهيمي
توصيفگر ها :
واكسن DNA , IHNV , گليكوپروتئين , ژن G , ماندگاري , ايمني مادري
استاد داور :
فاطمه پيكان حيرتي، اميد بيرقدار كشكولي
تاريخ ورود اطلاعات :
1401/01/28
رشته تحصيلي :
منابع طبيعي
دانشكده :
مهندسي منابع طبيعي
تاريخ ويرايش اطلاعات :
1401/01/28
چكيده فارسي :
واكسيناسيون يكي از مهمترين و موثرترين روشهاي پيشگيري و كنترل بيماريهاي عفوني ميباشد. بيماري نكروز عفوني مراكز خونساز (IHN)، از مهمترين بيماريهاي ويروسي آزادماهيان بهويژه ماهي قزلآلاي رنگينكمان است كه در سالهاي اخير، موجب خسارتهاي سنگين به واحدهاي تكثير و پرورش ماهيان سردابي شده است. براي مقابله با اين بيماري واكسن نوتركيب بيماري نكروز عفوني مراكز خونساز ماهي قزلآلا (RIBB-IHNV) در پژوهشكده زيستفناوري و مهندسي زيستي دانشگاه صنعتي اصفهان توليد شده است. اين مطالعه با هدف بررسي حضور واكسن ويروس نكروز عفوني مراكز خونساز (IHNV) در بافتهاي مختلف ماهي قزلآلاي رنگينكمان انجام شد. بدين منظور ماهيان مولد با وزن تقريبي 900گرم تا 1200 گرم در 5 تيمار آزمايشي (شامل گروه شاهد، 01/0، 1/0، 1 و 10 ميكروگرم واكسن به ازاي هر 5 گرم وزن ماهي) تقسيم شدند و سرم آنها در زمانهاي 9،4،1،0 ماه بعد از واكسيناسيون با آزمون خنثي سازي سرم( NA) مورد ارزيابي قرار گرفت. بعد از رسيدگي جنسي مولدين، عمليات تخمك گيري، لقاح مصنوعي، توليد تخم و در نهايت توليد لارو انجام شد. سپس بقا و ماندگاري واكسن در بافتهاي مختلف لارو ماهيها و مولدين از طريق تكثير ژن گليكوپروتين ( (Gواكسن در واكنش زنجيره اي پليمراز (PCR) و رديابي بيان ژن G در بافتهاي مختلف به روش PCR رونويسي معكوس (RT-PCR) بررسي شد. همچنين به منظور ارزيابي امكان انتقال ايمني از مولدين به فرزندان، لاروهاي حاصل از ماهيهاي مولد با ويروس IHNV مواجه شده و در پايان 30 روز درصد نسبي بقا و درصد مرگ و مير تجمعي آنها محاسبه شد. براساس نتايج در بازههاي زماني 2، 4 و 8 هفته پس از هچ، هيچ تكثيري براي ژن G واكسن در واكنش PCR و هيچ بياني براي آن در واكنش RT-PCR در بافتهاي مختلف لاروها مشاهده نشد كه بيانگر عدم انتقال واكسن از والدين به لاروها ميباشد. همچنين نتايج حاصله از بررسي در بافتهاي ماهيان مولد واكسينه شده (بافت كبد، طحال، قلب، زوائد پيلوريك، عضله، گنادهاي جنسي ) هيچگونه نشاني از حضور واكسن را نشان نداد. نتايج حاصل از مواجهه بچهماهيان با ويروس IHNV نشان داد كه واكسن در تيمارهاي مختلف باعث افزايش درصد بقا نسبي و كاهش درصد مرگ و مير تجمعي در مقايسه با گروه شاهد شده است. نتايج آزمون خنثي سازي سرم خون ماهيان مولد و سرم حاصل از زرده تخم آنها در تيمار هاي مختلف واكسن نشان داد كه واكسن RIBB-IHN در غلظتهاي مختلف باعث القا پاسخ ايمني با توليد آنتي بادي خنثي كننده ويروس IHNV در ماههاي مختلف بعد از واكسيناسيون شد است. به طور كلي نتايج حاصل از اين مطالعه بيانگر عدم ماندگاري واكسن در بافت ماهيان مولد و لارو بوده است و بر اساس آزمونهاي انجام شده انتقال ايمني از والد واكسينه به لارو ها اتفاق افتاده است.
چكيده انگليسي :
Vaccination is one of the most important and effective methods of prevention and control of infectious diseases. Infectious hematopoietic necrosis disease (IHN) is one of the most important viral diseases of salmonids, especially rainbow trout, which in recent years has caused severe damage to rearing farms of trout fish. To overcome this disease, a recombinant vaccine for infectious hematopoietic necrosis virus (RIBB-IHNV) has been produced in the Research Institute of Biotechnology and Bioengineering of Isfahan University of Technology. The aim of this study was to trace the presence of infectious necrosis virus (IHNV) vaccine in different tissues of rainbow trout. For this purpose, broodstocks weighing approximately 900 g to 1200 g were divided into 5 experimental treatments (including the control group, 0.01, 0.1, 1 and 10 micrograms of vaccine per 5 g of fish weight) and their serum was evaluated in serum neutralization test (NA) at 1, 4 and 9 months post-vaccination. After sexual maturation, the broodstocks were artificially inseminated to produce fertile eggs and larvae. Then, the survival and persistence of the vaccine in different tissues of broodstocks and their larvae were determined by the amplification of vaccine glycoprotein (G) gene in polymerase chain reaction (PCR) and tracking of its mRNA expression by reverse transcription PCR (RT-PCR). Also, in order to evaluate the possibility of immune transmission from parents to offspring, larvae from broodstocks were challenged with IHNV and at the end of 30 days, their relative survival rate and cumulative mortality rate were calculated. Based on the results at 2, 4 and 8 weeks after hatching, neither G gene amplification in PCR nor its expression in RT-PCR was observed in different tissues. Furthermore, examination of vaccinated broodstocks tissues (liver, spleen, heart, pyloric appendages, muscle, gonads) did not show any sign of the presence of the vaccine. The results of exposure of fish larvae to IHNV virus showed that the vaccine in different treatments increased the relative survival rate and decreased the cumulative mortality rate compared to the control group. According on the serum neutralization test of broodstocks and their egg yolk, RIBB-IHN vaccine in different concentrations and different months after vaccination can induce immune response by producing neutralizing antibody against IHNV. In general, the results of this study indicate that the vaccine does not persist in the tissues of broodstocks and their larvae, while the vaccine-induced immunity can be transferred from parents to the next generation.
استاد راهنما :
امير حسين جلالي، عيسي ابراهيمي
استاد داور :
فاطمه پيكان حيرتي، اميد بيرقدار كشكولي