توصيفگر ها :
آنزيم , پلي فنل اكسيداز , دارويي , كاتالاز
چكيده فارسي :
استفاده از روش‌هاي كشت بافت گياهي به عنوان يكي از جنبه‌هاي مهم زيست فناوري در زمينه حفاظت از گياهان دارويي در حال انقراض و توليد متابوليت هاي ثانويه ارزشمند دارويي محسوب مي¬شود. اين مطالعه به منظور بهينه¬سازي توليد كالوس در گياه خلال دندان (Ammi visgana L.) و سپس توليد متابوليت‌هاي ثانويه و برخي صفات بيوشيميابي تحت تأثير اليسيتورهاي زيستي كيتين و عصاره مخمر در شرايط درون شيشه‌اي انجام گرفت. به منظور برطرف كردن خواب بذر در گياه خلال دندان، از محيط كشت جامد موراشيگ و اسكوگ (MS) همراه با جيبرليك اسيد با غلظت 1/0 ميلي¬گرم در ليتراستفاده شد. سپس ريزنمونه¬هاي هيپوكوتيل به منظور القاي كالوس به محيط كشت MS حاوي تنظيم كننده¬هاي رشدي مختلف منتقل شدند. تجزيه واريانس نشان داد كه متغيرهاي هورموني تاثير معني¬داري بر روي درصد كالوس¬زايي و سرعت رشدكالوس داشتند. تركيب رشدي 3 ميلي¬گرم در ليتر BAP + ميلي¬گرم در ليتر NAA در محيط كشت موراشيك و اسكوگ بهترين درصد كالوس¬زايي (75/93%) و سرعت رشد كالوس (44/0 ميلي¬متر در ¬روز) را نشان داد. به منظور بررسي تاثير اليسيتورهاي كيتين و عصاره مخمر بر روي صفات مختلف بيوشيميائي در كالوس، غلظت¬هاي مختلف كيتين و عصاره مخمر (0، 100، 250، 500، 1000 ميلي¬گرم در ليتر) به عنوان اليسيتور انتخاب شدند. اثرات آن¬ها برمحتواي مالون دي آلدهيد، ميزان هيدروژن پراكسيداز، رشد كالوس، محتواي كل فنول، محتواي كل فلاونوئيد، محتواي كل فلاونول، آنتوسيانين، محتواي كل كلروفيل، كاروتنوئيد، فعاليت¬هاي آنتي¬اكسيداني به روش DPPH و FRAP، آنزيمPAL، آنزيمCAT، آنزيمPPO، خلين و ويسناگين مورد بررسي گرفت. كيتين وعصاره مخمر باعث افزايش معني¬دار محتواي متابوليت¬هاي ثانويه و فعاليت آنتي¬اكسيداني و فعاليت آنزيم¬ها در كالوس شد. همچنين بالاترين ميزان محتواي فنل، فلاونوئيد، فلاونول در تيمار 500 ميلي¬گرم در ليتر عصاره مخمر و بيشترين ميزان هيدروژن پراكسيداز، مالون دي آلدهيد، آنتي اكسيدان DPPH در تيمار ميلي¬گرم در ليتر عصاره مخمر و آنزيم PPO در تيمار 250 ميلي¬گرم در ليتر عصاره مخمر مشاهده شد. بالاترين ميزان آنتوسيانين، كلروفيل و كاروتنوئيد و آنزيم CAT در تيمار 250 ميلي¬گرم در ليتر كيتين و بيشترين ميزان آنزيم PAL و آنتي¬اكسيدان FRAP در تيمار 500 ميلي¬گرم در ليتركيتين مشاهده شد. استفاده از غلظت بهينه عصاره مخمر (1000 ميلي¬گرم در ليتر) منجر به توليد حداكثري تركيب دارويي (ويسناگين) و همينطور (غلظت 500 ميلي¬گرم در ليتر) كيتين منجر به توليد حداكثري تركيب دارويي (خلين) از طريق كشت كالوس در خلال دندان شد. براساس نتايج، عصاره مخمر توانايي بيشتري در افزايش متابوليت‌هاي فعال زيستي مهم در كشت كالوس خلال دندان در مقايسه با كيتين نشان داد.
چكيده انگليسي :
The use of plant tissue culture methods becomes valuable as one of the important environmental aspects of technology in the field of medicinal plant protection and the production of secondary medicinal metabolites. This study was carried out in order to optimize the production of callus in Ammi visgana L. and then the production of secondary metabolites and some biochemical traits under the influence of chitin and yeast extract biological elicitors in vitro. In order to eliminate seed dormancy in toothpick plant, Murashing and Skoog (MS) solid culture medium with gibberellic acid concentration of 0.1 mg/L was used. Then hypocotyl explants were transferred to MS culture medium containing different growth regulators in order to induce callus. Analysis of variance showed that hormonal variables had a significant effect on callus formation percentage and callus growth rate. The growth combination of 3 mg/L BAP + 1 mg/L NAA showed the best callus percentage (93.75 %) and callus growth rate (0.44 mm/day) in Midrashic and Skoog culture medium. In order to investigate the effect of chitin elicitors and yeast extract on various biochemical traits in callus, different concentrations of chitin and yeast extract (0, 100, 250, 500, 1000 mg/L) were selected as elicitors. Their effects on malondialdehyde content, hydrogen peroxidase level, callus growth, total phenol content, total flavonoid content, total flavonol content, anthocyanin, total chlorophyll content, carotenoid, antioxidant activities by DPPH and FRAP methods, PAL enzyme, CAT enzyme, PPO, khellin and Visnagin enzymes were investigated. Chitin and yeast extract significantly increased the content of secondary metabolites and antioxidant activity and enzyme activity in callus. Chitin and yeast extract significantly increased the content of secondary metabolites and antioxidant activity and enzyme activity in callus. Also, the highest content of phenol, flavonoid, flavonol in the treatment of 500 mg/L of yeast extract and the highest amount of hydrogen peroxide, malondialdehyde, DPPH antioxidant in the treatment of 1000 mg/L of yeast extract and PPO enzyme in the treatment of 250 mg/L Yeast extract was observed. The highest amount of anthocyanin, chlorophyll, carotenoid and CAT enzyme was observed in the treatment of 250 mg/L chitin, and the highest amount of PAL enzyme and antioxidant FRAP was observed in the treatment of 500 mg/L chitin. The use of the optimal concentration of yeast extract (1000 mg/L) led to the maximum production of medicinal compound (Visnagin) and also (concentration of 500 mg/L) chitin led to the maximum production of medicinal compound (Khellin) through callus culture in the teeth. Based on the results, yeast extract showed more ability to increase important bioactive metabolites in interdental callus culture compared to chitin.
