پديد آورنده :
رضايي، داود مراد
عنوان :
همسانه سازي و انتقال پايدار ژن فعال كننده پلاسمينوژن بافتي (t-PA)با منشاء انساني در گياه توتون
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
گرايش تحصيلي :
بيوتكنولوژي
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
چهارده،85ص.:مصور،جدول،نمودار(رنگي)
يادداشت :
ص.ع.به فارسي و انگليسي
استاد راهنما :
بدرالدين ابراهيم سيد طباطبايي، هوشنگ عليزاده
استاد مشاور :
سيروس قبادي
توصيفگر ها :
كاهوي تراريخت , توتون تراريخت , فيبرينولايز
تاريخ نمايه سازي :
10/3/93
استاد داور :
بهرام شريف نبي، جهانگير خواجه علي
چكيده فارسي :
چكيده در سالهاي اخير استفاده از گياهان بهعنوان ميزبانهايي براي توليد پپتيدهاي نوتركيب باارزش بهدليل مزايلايي همنلون داده اسلتي يكلي از پپتيلدهاي ايمني باال هزينه پايين و تغييرات پس از ترجمه سلح وسلي ي از تحقيقلات را بلهخلود اختصلا باارزشي كه هزينه باالي توليد آن بررسي ساير سيستم هاي توليد پروتئين نوتركيب نظير گياهان را براي توليد ارزان و ايمنتلر آن الزامي كرده است ف الكننده پالسمينوژن بافتي tPA ميباشدي گليكوپروتئين tPA دارويي گرانقيمت است كه به منظور انحالل اختصاصي لختههاي خوني ايجاد شده مت اقب برخي بيماريهاي قلبي عروقي نظير سكته و ترومبوآمبولي تجويز ميشودي هدف از انجام پژوهش حاضر بررسي قابليت توليد پروتئين نوتركيب tPA در سيستمهاي گياهي به ميزباني گياهان توتون و كاهو و همننين مقايسه تاثير سه سيگنال پپتيد Extensin Zera و KDEL بر توليد پلروتئين نوتركيلب tPA در گياهلان مليباشلدي در ايلن پلژوهش cDNA ي ژن tPA تحت كنترل پليشبرنلده CaMV 53S و خاتمله دهنلده NOS بله هملراه سله سليگنال پپتيلد Extensin Zera و KDEL بهصورت سه سازه مختلف با نامهاي pExt pZt و pKt به ژنوم گياهان توتون و كاهو بلا روش ميلانجيگري اگروبلاكتريوم هلاي PCR و RT منتق شدي نتايج آناليز گياهان تراريخت نس هاي 0 T و 1 T در دو سلح DNA و RNA بلا اسلتفاده از تكنيل PCR صحت حضور هر سه سازه مورد استفاده و توليد رونوشت از آنها را تائيد نمودي همننين آناليز دادههاي حاصل از آزملون االيزا بر روي گياهان توتون تراريخت نشان داد كله تلاثير در افلزايش توليلد پلروتئين نوتركيلب tPA در نسل 0 T بلراي گياهلان تراريخت شده با سازههاي pKt و pExt كم و براي سازه pZt بسيار ناچيز و فاقد تفاوت م نيدار با گياهان غيرتراريخت مليباشلدي اين نتايج در مورد گياهان تراريخت نس 1 T بسيار متفاوت بود و نشان داد كه بيشترين تلاثير در افلزايش توليلد پلروتئين نوتركيلب tPA در نس 1 T بهترتيب براي گياهان تراريخت شده با سازههاي pExt pZt و pKt اتفاق افتادي مقدار پروتئين توليد شده بلا ايلن سازهها به ترتيب برابر با 03 3 013 3 و 033 3 نانوگرم در ميلي ليتر محاسبه شدي با توجه به يكنواخت بودن سن گياهان تراريخت نس 1 T و عدم اين يكنواختي در گياهان نس 0 T بهعللت علدم هلم زملاني در كشلف گياهلان تراريخلت احتملاال توليلد پلروتئين نوتركيب در برخي گياهان نس 0 T به علت پير بودن آنها دچار تقلي شده استي بنابراين توليد پروتئين نوتركيب در نس 1 T مبناي مقايسه تاثير سيگنال پپتيدها قرار گرفتي لذا بر اين اساس عالوه بر قابليت انتقال ژن tPA به گياهان توتون و كاهو به صورت پايدار نتيجهگيري ميشود كه سيگنال پپتيدهاي Zera و Extensin گزينه هلاي مناسلبي بلراي افلزايش توليلد پلروتئين نوتركيلب tPA در مقايسه با سيگنال KDEL ميباشندي واژگان كليدي ف الكننده پالسمينوژن بافتي كاهوي تراريخت توتون تراريخت فيبرينواليز
چكيده انگليسي :
11Cloning and Stable Transformation of Human Tissue Plasminogen Activator tPA Gene in Tobacco Plants Davod Morad Rezaee davodrezaee@yahoo com 14 01 2014 Department of Agricultural Biotechnology Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 Iran Degree M Sc Language Farsi B E Sayed Tabatabaei sayedt@cc iut ac ir H Alizadeh halizade@ut ac ir Abstract In recent years using plants as bioreactors for producing valuable recombinant peptides havegained a dominant part of the researches because of their advantages like product safety low costsand post translational modifications One of the valuable peptides which its high production costs have led to considering other recombinant protein production systems like plants for cheaper and saferproduction is tissue plasminogen activator tPA Glycoprotein tPA is a highly priced medicine whichis specifically used for solving blood coagulations caused by some heart and vein diseases likeischaemic stroke and acute myocardial infarction The aim of the current study is to evaluate theproduction capability of recombinant tPA in plant system using tobacco and lettuce hosts and alsocomparing the impact of Zera Extensin and KDEL signal peptides on tPA recombinant proteinproduction in plant systems In this study cDNA of tPA gene under the control of CaMv 35Spromoter and NOS terminator in companion with three Zera Extensin and KDEL signal peptides informs of three different constracts named pZt pExt and pKt was transferred into tobacco and lettucenuclear genomes by Agrobacterium mediated gene transfer technique and the presence of all theconstructs in T0 and T1 transgenic plants were confirmed through PCR and RT PCR techniques Theresults obtained from the Eliza test on transgenic tobacco plants showed that an increase in tPArecombinant protein production in T0 transgenic plants but it was low in transgenic plants with pKtand pExt and very low for pZt constructs respectively There was also no significant differencebetween non transgenic plants and transgenic ones Data analysis results from the production of tPArecombinant protein in T1 transgenic plants containing pZt pExt and pKt constructs were completelydifferent and were 0 03 0 014 and 0 005 nanogram per milliliter respectively Although in terms ofproducing recombinant protein some non uniformity were observed in T0 ones the T1 transgenicplant were used as the base caculation of signal peptide impacts It could be concluded that despite thecapability of stable transformation of tPA gene to tobacco and lettuce plants the Zera and Extensinsignal peptides are suitable construscts for producing tPA recombinant protein as compared to KDELsignal Keywords Tissue Plasminogen Activator Transgenic lettuce Transgenic tobacco Fibrinolysis
استاد راهنما :
بدرالدين ابراهيم سيد طباطبايي، هوشنگ عليزاده
استاد مشاور :
سيروس قبادي
استاد داور :
بهرام شريف نبي، جهانگير خواجه علي
