پديد آورنده :
ندري، پريسا
عنوان :
تاثير آگونيست Sonic hedgehog ﴿پورمورفامين﴾ در روند بلوغ و تغييرات اپي ژنتيك اووسيت هاي گوسفندي بالغ شده در محيط آزمايشگاهي
مقطع تحصيلي :
كارشناسي ارشد
محل تحصيل :
اصفهان: دانشگاه صنعتي اصفهان، دانشكده كشاورزي
صفحه شمار :
دوازده،55ص.:مصور،جدول،نمودار
يادداشت :
ص.ع.به فارسي و انگليسي
استاد راهنما :
سعيد انصاري معياري، محمد صالحي
استاد مشاور :
احمد رياسي، حسين اباذري
توصيفگر ها :
بلوغ هسته , بلوغ سيتوپلاسم , تخمك گوسفند
تاريخ نمايه سازي :
20/8/93
استاد داور :
اميرحسين مهدوي، محمدرضا سبزعليان
چكيده فارسي :
60 چكيده برخي فاكتورهاي رشد و مولكولهاي كوچك نقش مهمي در مسير سيگنالي سونيك هدجيهاگ SHH دارند از جمله اين مولكولهاي كوچك ميتوان به پورمورفامين اشاره كرد كه تركيب آگونيست مولكول سونيك هدجيهاگ بوده كه نقش مهمي در تنظيم فعاليت گيرندهها و عوامل رونويسي دارد در اين مطالعه تاثيرآگونيست پورمورفامين در روند بلوغ تخمكبالغ شده گوسفند در آزمايشگاه و همچنين تاثير اپيژنتيك اين آگونيست بر روند بلوغ تخمك مورد ارزيابي قرار داده شد پس از جمعآوري نمونههاي تخمدان گوسفندي از كشتارگاه مجموعه كومولوس اووسيت در محيط حاوي غلظتهاي 251 و 225 نانوگرم پورمورفامين كشت داده شد بعد از 11 ساعت توسط آنزيم هيالورونيداز سلولهاي كومولوس از تخمك جدا شد و از رنگ آميزي هوخست و سل تراكر بلو جهت ارزيابي بلوغ هستهاي و سيتوپالسمي استفاده گرديد سپس توسط ميكروسكوپ فلورسنت عكسبرداري انجام شد جهت تجزيه آماري از نرم افزار Image j استفاده شد 11 ساعت بعد از كشت تخمكها در محيط IVM تخمكهاي بالغ شده در مجاورت با اسپرمهاي گوسفند قرار داده شد تا لقاح صورت گيرد 84 ساعت بعد با استخراج RNA از جنين دو سلولي از تكنيك Real Time PCR و نرم افزار REST براي تعيين بيان ژنهاي 1 Hdac2 Hdac1 GLI1 SMO PTC و 3 Hdac استفاده گرديد جهت بررسي ميزان كليواژ جنينهاي پارتنوژنژ 11 ساعت بعد از بلوغ تخمكها وارد مرحله فعالسازي شد و تا مرحله بالستوسيست پيش رفت نتايج بدست آمده از غلظت 251 نانوگرم پورمورفامين در محيط بلوغ تخمك نسبت به گروه كنترل نشان داد 28 درصد از تخمكها توانسته بودند تقسيم سلولي را تا متافاز ميوز II ادامه دهند اگرچه اين افزايش از نظر آماري معنيدار نبود در غلظت 225 نانوگرم پورمورفامين ميزان بيان ژنهاي 1 PTC كاهش داشت در حاليكه بيان ژنهاي SMO و 1 GLI بطور معنيداري افزايش پيدا كرد 52 2 p ضمنا مشاهده شد كه در اين غلظت بيان ژنهاي ژنهاي 1 Hdac2 Hdac و 3 Hdac كاهش يافت در ارزيابي ميزان استيالسيون 21 H4K مشاهده گرديد كه در غلظت 225 نانوگرم پورمورفامين بيشترين ميزان استيالسيون رخ ميدهد عالوه بر اين مشاهده شد در حضور پورمورفامين تعداد جنينهاي پارتنوژنز افزايش پيدا نمود در اين مطالعه استفاده از پورمورفامين تاثير قابل توجهاي بر ميزان بلوغ هستهاي تخمك نداشت در مقابل پورمورفامين ميزان بلوغ سيتوپالسمي را افزايش داد بر اين اساس ميتوان چنين نتيجهگيري نمود كه پورمورفامين براي بهبود بلوغ سيتوپالسمي تخمك ميتوان مفيد باشد همچنين اين ماده ميتواند موجب فعال شدن مسير سيگنالي سونيك هدجيهاگ ميگردد كلمات كليدي بلوغ هسته بلوغ سيتوپالسم پورمورفامين تخمك گوسفند
چكيده انگليسي :
56Effect of Sonic Hedgehog Agonist Purmorphamine on OocyteMaturation and Epigenetic Modification of in Vitro Matured SheepOocytes Parisa Nadri p nadri@ag iut ac ir 3 September 2014 Departement of Anlmal Science College of Agriculture Isfahan University of Technology Isfahan 84156 83111 IranDegree M Sc Language FarsiS Ansari mahyari S ansari@cc iut ac irM Salehi M salehi@sbmu ac irAbstractSome of the small molecules such as Purmorphamine play an important role in the Sonic Hedgehog SHH signaling pathway Purmorphamine is an agonist of SHH which plays a critical role in theregulation activity of receptors transcription factors and also can be used to confirm the Sonic Hedgehogpathway In this study effect of Purmorphamine on oocyte maturation and epigenetic modification of invitro matured sheep oocytes were considered Ovaries were obtained from local abattoir and cumulus oocyte complexes cultured in the medium containing various concentrations of purmorphamine 250 and500ng plus a control without purmorphaminel After 24h maturation oocytes striped from cumulus cellsand stained with Hoechst and cell tracker blue for assessment of nuclear and cytoplasmic maturationrespectively fluorescent microscope was used for photograph taken digital images analyzed by Image Jsoftware For fertilization 22 h after maturing the oocytes they were transferred to fertilization mediumand co incubated with sperm for 18 h Two cell embryos were used for RNA extraction and total RNA forReal Time PCR The records were analyzed by REST software Developmental competence oocyteexamined using artificial activation cleavage and blastocyst rate measured on D3 and D8 post activationrespectively The results showed that 250ng of Purmorphamine induced nuclear maturation and about 81percent of oocyte showed meiosis II stage but not significantly different from the control group p 0 05 Based on statistical analysis 500 ng purmorphamine reduced expression PTC but SMO and GLIsignificantly increase p 0 05 Furthermore it was observed that the expression of Histone deacetylase1 3 was reduced Acetylation of histone H4 lysines 12 was significantly higher in 500 ng Purmorphamine Besides the results showed that in the presence of purmorphamine embryo development wassignificantly increased In conclusion purmorphamine induces cytoplasmic maturation of oocyte and canbe used to confirm the Sonic Hedgehog pathway Keywords Nuclear Mturation cytoplasmic Maturation Sheep Oocyte Purmorphamine
استاد راهنما :
سعيد انصاري معياري، محمد صالحي
استاد مشاور :
احمد رياسي، حسين اباذري
استاد داور :
اميرحسين مهدوي، محمدرضا سبزعليان
